作者konnankonnan (天使海豚)
看板Biotech
標題[求救] 如何treat 懸浮型細胞 ??
時間Mon Dec 3 15:03:00 2012
我的實驗想觀察一個疑似 COX-2 inhibitor (藥劑 A) 是否會抑制淋巴細胞活化
我看了paper, 別人的作法是將 (藥劑 A) 先 treat 貼附型細胞 (A549), 30 min
然後再用 PMA 刺激 A549...然後再分析 COX-2 的表現
由於這個藥劑目前相關資訊有限, 而且也找不到有人用在淋巴細胞上,
而淋巴球細胞又是懸浮型細胞, 所以只能自己想像一下作法
我的想法是:
1. 將淋巴細胞培養在plate上, 30 min, 等待自然沈降,
2. 加入(藥劑 A), 時間為 30 min
3. 將細胞取出, 以離心方式得到 pellet
4. 用新的培養液懸浮細胞, 然後在養回 plate 上, 30 min, 等待沈降
5. 加入 PMA 做刺激, 時間到之後分析相關蛋白的表現
(步驟 3 的目的為 wash 用途, 只是 paper 沒有註明需不需要, 這是自己想的)
由於一般貼附型細胞只要將培養液吸出, 換上新的即可,
但是我養的是懸浮席細胞, 很害怕一吸之後, 細胞會被吸走
不知道版上是否有前輩能夠提供經驗或是一些文獻給小弟做參考...謝謝
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◆ From: 122.146.177.66
1F：→ blence:請問加藥前必須讓細胞"等待自然沈降"的目的是什麼？ 12/03 19:50
2F：→ wang7514:如果你的細胞不會因為A藥劑處理而死亡 12/04 17:09
3F：→ wang7514:建議你可以同時試試跳過步驟3 12/04 17:10
4F：→ wang7514:原PO自然沈降細胞應該是希望細胞都貼附在底部再作處理 12/04 17:12
5F：→ wang7514:不過如果是THP1這種淋巴細胞 可能震蕩一下就飄了@@ 12/04 17:13