作者konnankonnan (天使海豚)
看板Biotech
标题[求救] 如何treat 悬浮型细胞 ??
时间Mon Dec 3 15:03:00 2012
我的实验想观察一个疑似 COX-2 inhibitor (药剂 A) 是否会抑制淋巴细胞活化
我看了paper, 别人的作法是将 (药剂 A) 先 treat 贴附型细胞 (A549), 30 min
然後再用 PMA 刺激 A549...然後再分析 COX-2 的表现
由於这个药剂目前相关资讯有限, 而且也找不到有人用在淋巴细胞上,
而淋巴球细胞又是悬浮型细胞, 所以只能自己想像一下作法
我的想法是:
1. 将淋巴细胞培养在plate上, 30 min, 等待自然沈降,
2. 加入(药剂 A), 时间为 30 min
3. 将细胞取出, 以离心方式得到 pellet
4. 用新的培养液悬浮细胞, 然後在养回 plate 上, 30 min, 等待沈降
5. 加入 PMA 做刺激, 时间到之後分析相关蛋白的表现
(步骤 3 的目的为 wash 用途, 只是 paper 没有注明需不需要, 这是自己想的)
由於一般贴附型细胞只要将培养液吸出, 换上新的即可,
但是我养的是悬浮席细胞, 很害怕一吸之後, 细胞会被吸走
不知道版上是否有前辈能够提供经验或是一些文献给小弟做参考...谢谢
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◆ From: 122.146.177.66
1F：→ blence:请问加药前必须让细胞"等待自然沈降"的目的是什麽？ 12/03 19:50
2F：→ wang7514:如果你的细胞不会因为A药剂处理而死亡 12/04 17:09
3F：→ wang7514:建议你可以同时试试跳过步骤3 12/04 17:10
4F：→ wang7514:原PO自然沈降细胞应该是希望细胞都贴附在底部再作处理 12/04 17:12
5F：→ wang7514:不过如果是THP1这种淋巴细胞 可能震荡一下就飘了@@ 12/04 17:13