作者piano0525 (尋找大肚腩)
看板Biotech
標題[求救] western blot transfer
時間Sun Dec 2 14:17:45 2012
請問板上大大是否有人跑過565左右分子量的蛋白嗎?
transfer的條件是?
我之前用過60mA O/N
但是回去染膠發現大分子的幾乎都沒過去(已把250的marker跑到5%膠的底部了)
希望大家幫幫忙
謝謝
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◆ From: 203.64.247.31
1F：推 leoblack:wet transfer?!我一般7X kda的都100mA o/n了~你只跑60?! 12/03 11:20
2F：→ allisa:你要transfer大分子蛋白的話 transfer buffer中要含0.1%SDS 12/03 15:14
3F：→ allisa:然後如果是用pvdf membrane就不要加methanol(活化membrane 12/03 15:15
4F：→ allisa:還是要用) 不過buffer就不加methanol 12/03 15:16
5F：→ allisa:然後我都是用400mA 60min 但tank要埋在冰裡降溫 12/03 15:18
6F：→ blence:若是一般transfer條件,400mA 60min對565kda的時間絕對太少 12/03 19:45
7F：→ ivylikecat:我們家transfer大分子會換buffer~ 12/14 18:24
8F：→ ivylikecat:我們是溼式..跑100v 3~4小時 4度C 12/14 18:25
9F：推 windyflyer:可以在此偷偷求transfer buffer(含methanol)配方嗎? 12/24 18:56
10F：→ windyflyer:我們家自從某一次搞丟以前的transfer buff配方用隔壁 12/24 18:56
11F：→ windyflyer:實驗室的之後 都有tran不乾淨的狀況 從35kDa就會殘留 12/24 18:57