作者piano0525 (寻找大肚腩)
看板Biotech
标题[求救] western blot transfer
时间Sun Dec 2 14:17:45 2012
请问板上大大是否有人跑过565左右分子量的蛋白吗?
transfer的条件是?
我之前用过60mA O/N
但是回去染胶发现大分子的几乎都没过去(已把250的marker跑到5%胶的底部了)
希望大家帮帮忙
谢谢
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◆ From: 203.64.247.31
1F：推 leoblack:wet transfer?!我一般7X kda的都100mA o/n了~你只跑60?! 12/03 11:20
2F：→ allisa:你要transfer大分子蛋白的话 transfer buffer中要含0.1%SDS 12/03 15:14
3F：→ allisa:然後如果是用pvdf membrane就不要加methanol(活化membrane 12/03 15:15
4F：→ allisa:还是要用) 不过buffer就不加methanol 12/03 15:16
5F：→ allisa:然後我都是用400mA 60min 但tank要埋在冰里降温 12/03 15:18
6F：→ blence:若是一般transfer条件,400mA 60min对565kda的时间绝对太少 12/03 19:45
7F：→ ivylikecat:我们家transfer大分子会换buffer~ 12/14 18:24
8F：→ ivylikecat:我们是湿式..跑100v 3~4小时 4度C 12/14 18:25
9F：推 windyflyer:可以在此偷偷求transfer buffer(含methanol)配方吗? 12/24 18:56
10F：→ windyflyer:我们家自从某一次搞丢以前的transfer buff配方用隔壁 12/24 18:56
11F：→ windyflyer:实验室的之後 都有tran不乾净的状况 从35kDa就会残留 12/24 18:57