作者rickkao11 (rickkao11)
看板Biotech
標題[求救] Luciferase assay system
時間Mon Nov 26 11:48:35 2012
想請問一下大家關於luciferase internal control的問題
目前是用promega的dual系統，pGL3 cotransfection with pRL-TK
可是一直怪怪的，
老師就想去查查看如果改用GFP當control是否可行
之前版上似乎有人這樣做過，不過並沒有回應
想請問一下如果cotransfection GFP和 pGL3的話
在測光的時候是否有影響
(雖然就原理上一個是冷光一個是螢光應該不會有影響
可是還是想問問看有沒有人做過)
另外想請問一下最近有業務在推Pierce luciferase dual system
那時問的價錢有差，而且似乎不用像promega加兩種試劑
老師還蠻有興趣的
想請問有沒有人用過，用起來怎麼樣?
謝謝!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：→ lovenainai:不要鬧了.. 11/26 11:53
2F：→ rickkao11:不好意思可以請問一下是為什麼嗎? 11/26 12:34
3F：→ blence:你們有機器可以讀各種波長的冷光,甚至還能激發螢光嗎？ 11/26 12:50
4F：→ rickkao11:老師是打算要用GFP的抗體壓western，是怕說測冷光時會 11/26 13:14
5F：→ rickkao11:不會影響 11/26 13:14
6F：→ rickkao11:另外是有考慮trysin下來的細胞分兩堆，一堆做luciferase 11/26 13:21
7F：→ rickkao11:一堆拿去測Flow，不過主要的問題是在於說測冷光時，gGPP 11/26 13:22
8F：→ rickkao11:會不會影響到Luciferase的值 11/26 13:23
9F：→ blence:既然GFP要用WB壓,不如像以前送pSV-b-gal好了,reader就可測 11/26 14:22
10F：推 HEK293:gfp不可能影響，發光機制根本不同 11/26 16:20
11F：→ HEK293:dual reporter很貴但是定量上比較嚴謹。 11/26 16:21
12F：→ HEK293:用gfp當control是因為不想買coeleterazine? 11/26 16:22
13F：推 joseph103331:不會影響啦.... 11/26 18:58
14F：→ Realthugz:我以前用Beta gal 同時也有送含GFP的plasmid 11/26 19:45
15F：→ Realthugz:測的是luciferase 也是Promega 沒問題阿 11/26 19:46
16F：→ a90648:實驗室有人做過，沒問題 11/26 21:38
17F：→ nzj:一個要激發光源,一個部用;一個不需reagents,一個要 01/05 15:06
18F：→ nzj:另外,跑western時,luciferase應該以denature (SDS-PAGE) 01/05 15:08