作者rickkao11 (rickkao11)
看板Biotech
标题[求救] Luciferase assay system
时间Mon Nov 26 11:48:35 2012
想请问一下大家关於luciferase internal control的问题
目前是用promega的dual系统，pGL3 cotransfection with pRL-TK
可是一直怪怪的，
老师就想去查查看如果改用GFP当control是否可行
之前版上似乎有人这样做过，不过并没有回应
想请问一下如果cotransfection GFP和 pGL3的话
在测光的时候是否有影响
(虽然就原理上一个是冷光一个是萤光应该不会有影响
可是还是想问问看有没有人做过)
另外想请问一下最近有业务在推Pierce luciferase dual system
那时问的价钱有差，而且似乎不用像promega加两种试剂
老师还蛮有兴趣的
想请问有没有人用过，用起来怎麽样?
谢谢!
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◆ From: 140.112.121.97
1F：→ lovenainai:不要闹了.. 11/26 11:53
2F：→ rickkao11:不好意思可以请问一下是为什麽吗? 11/26 12:34
3F：→ blence:你们有机器可以读各种波长的冷光,甚至还能激发萤光吗？ 11/26 12:50
4F：→ rickkao11:老师是打算要用GFP的抗体压western，是怕说测冷光时会 11/26 13:14
5F：→ rickkao11:不会影响 11/26 13:14
6F：→ rickkao11:另外是有考虑trysin下来的细胞分两堆，一堆做luciferase 11/26 13:21
7F：→ rickkao11:一堆拿去测Flow，不过主要的问题是在於说测冷光时，gGPP 11/26 13:22
8F：→ rickkao11:会不会影响到Luciferase的值 11/26 13:23
9F：→ blence:既然GFP要用WB压,不如像以前送pSV-b-gal好了,reader就可测 11/26 14:22
10F：推 HEK293:gfp不可能影响，发光机制根本不同 11/26 16:20
11F：→ HEK293:dual reporter很贵但是定量上比较严谨。 11/26 16:21
12F：→ HEK293:用gfp当control是因为不想买coeleterazine? 11/26 16:22
13F：推 joseph103331:不会影响啦.... 11/26 18:58
14F：→ Realthugz:我以前用Beta gal 同时也有送含GFP的plasmid 11/26 19:45
15F：→ Realthugz:测的是luciferase 也是Promega 没问题阿 11/26 19:46
16F：→ a90648:实验室有人做过，没问题 11/26 21:38
17F：→ nzj:一个要激发光源,一个部用;一个不需reagents,一个要 01/05 15:06
18F：→ nzj:另外,跑western时,luciferase应该以denature (SDS-PAGE) 01/05 15:08