作者eric2853 (eric)
看板Biotech
標題[求救] ICC double stain?
時間Sat Nov 24 19:17:47 2012
各位板友好
我最近在做ICC的實驗
必須要double stain兩種抗體
第一種的抗體host是rabbit
第二種是goat
因此我使用的二抗也有兩種 分別是donkey anti-goat(Cy3)
以及donkey-anti-rabbti(FITC)
我問學長時 他告訴我一抗跟二抗都可以以1:1混合一起加下去
一抗4度C overnight 而二抗室溫一小時
可是我用顯微鏡看的時候 兩個都沒有出現螢光!!!
所以想請問各位
是否一抗跟二抗不可以同時加下去呢??
謝謝各位
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◆ From: 140.112.121.98
1F：→ blence:[猜測] 你應該沒有單染抓好條件 11/24 21:48
2F：→ eric2853:嗯我還沒單染 明天會來試試看 只是想先問問大家:) 11/24 21:59
3F：→ yauwin:邏輯上 一二抗不能一起加 抗體先混在一起會產生抗體凝集效 11/25 03:03
4F：→ yauwin:應 一抗會被二抗凝集 不能好好作用其antigen 11/25 03:04
5F：→ yauwin:除了特別廠商賣的二抗 才可以先和一抗加一起 11/25 03:05
6F：→ eric2853:樓上 不好意思 我指的是 先加完double stain的兩個一抗 11/25 09:21
7F：→ eric2853:作用overnight之後 再加入兩個二抗 並沒有一二抗一起加喔 11/25 09:22
8F：→ vandia:我的double stain一直都是混加rabbit跟mouse 沒有問題 11/25 11:16
9F：→ vandia:我覺得問題可能出在一抗跟抗原的那部份太低 11/25 11:17
10F：→ eric2853:不好意思 是指抗體濃度或是抗原表現太低嗎? 11/25 11:29
11F：→ blence:問題不是濃度太低或怎樣,而是做ICC本來就要先測試單染一抗 11/25 15:37
12F：→ blence:或二抗先測試抗體專一性與調整適合螢光強度,才會合併一二抗 11/25 15:40
13F：→ blence:每個抗原只要經過各別一,二抗測試,就能做你設想的co-stain 11/25 15:43
14F：→ blence:做ICC沒測試抗體竟得到不能一起染的推測,很缺乏實驗邏輯 11/25 15:49
15F：→ eric2853:樓上我了解了 謝謝 11/25 22:09