作者eric2853 (eric)
看板Biotech
标题[求救] ICC double stain?
时间Sat Nov 24 19:17:47 2012
各位板友好
我最近在做ICC的实验
必须要double stain两种抗体
第一种的抗体host是rabbit
第二种是goat
因此我使用的二抗也有两种 分别是donkey anti-goat(Cy3)
以及donkey-anti-rabbti(FITC)
我问学长时 他告诉我一抗跟二抗都可以以1:1混合一起加下去
一抗4度C overnight 而二抗室温一小时
可是我用显微镜看的时候 两个都没有出现萤光!!!
所以想请问各位
是否一抗跟二抗不可以同时加下去呢??
谢谢各位
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◆ From: 140.112.121.98
1F：→ blence:[猜测] 你应该没有单染抓好条件 11/24 21:48
2F：→ eric2853:嗯我还没单染 明天会来试试看 只是想先问问大家:) 11/24 21:59
3F：→ yauwin:逻辑上 一二抗不能一起加 抗体先混在一起会产生抗体凝集效 11/25 03:03
4F：→ yauwin:应 一抗会被二抗凝集 不能好好作用其antigen 11/25 03:04
5F：→ yauwin:除了特别厂商卖的二抗 才可以先和一抗加一起 11/25 03:05
6F：→ eric2853:楼上 不好意思 我指的是 先加完double stain的两个一抗 11/25 09:21
7F：→ eric2853:作用overnight之後 再加入两个二抗 并没有一二抗一起加喔 11/25 09:22
8F：→ vandia:我的double stain一直都是混加rabbit跟mouse 没有问题 11/25 11:16
9F：→ vandia:我觉得问题可能出在一抗跟抗原的那部份太低 11/25 11:17
10F：→ eric2853:不好意思 是指抗体浓度或是抗原表现太低吗? 11/25 11:29
11F：→ blence:问题不是浓度太低或怎样,而是做ICC本来就要先测试单染一抗 11/25 15:37
12F：→ blence:或二抗先测试抗体专一性与调整适合萤光强度,才会合并一二抗 11/25 15:40
13F：→ blence:每个抗原只要经过各别一,二抗测试,就能做你设想的co-stain 11/25 15:43
14F：→ blence:做ICC没测试抗体竟得到不能一起染的推测,很缺乏实验逻辑 11/25 15:49
15F：→ eric2853:楼上我了解了 谢谢 11/25 22:09