作者aggaci (可找我下棋..)
看板Biotech
標題Re: [求救] Rat cortical neuron 培養
時間Thu Nov 15 15:03:34 2012
※ 引述《kattyhouse (kat)》之銘言：
: 因為實驗室剛開始做cortical neuron的primary culture...
: 所以想跟版上前輩們請教
: 是取出生24hr內SD Rat 的cortex 使成為 single cell
: 再利用DMEM/F12+10% FBS 培養24hr後
: 才換成DMEM/F12+B27+Ara-C (10uM)
: 並且會另外添加鉀離子(K+)使Medium中的鉀是20-30mM
: culture在PDL(poly-D-lysine) coating 的coverslip上 (cell density是2X10^5)
: 但是細胞會在1週內死亡
: (4-5天會有morphology的change會有細胞空洞並且有凋亡的現象)
: 但一般都可以培養2week以上...
: 請問有前輩知道是哪裡有做錯的地方嗎??
: 謝謝
primary neuron請取懷孕16-18天的胎鼠
純度高又好養!
medium用neurobasal+B27
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單身不代表寂寞，寂寞是走在一個不愛妳的人身邊的時候。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.253.72
1F：推 kattyhouse:不過因為成本考量及我同學他不敢(想)剖腹所以就沒有辦 11/15 21:23
2F：→ kattyhouse:法用你的方法做耶~不過我不清楚16-18天跟出生後的老鼠 11/15 21:24
3F：→ kattyhouse:有很大的差別嗎? 謝謝你喔~ 但neurobasal是liquid的培 11/15 21:25
4F：→ kattyhouse:養液~想請問您有買過powder的嗎? 謝謝~ 11/15 21:26
5F：推 jasonstudio:我們實驗室也有做耶 也是用胎鼠哦 11/16 00:54
6F：→ jasonstudio:不過我記得弄成SINGLE CELL的過程蠻重要的 11/16 00:55
7F：→ jasonstudio:另外neurobasal + b27無誤~ 11/16 00:57
8F：→ aggaci:P1或p2的neuron culture大部份都是astrocyte 11/16 12:16
9F：→ aggaci:E16-E18的neuron80%以上是neuron 11/16 12:16
10F：推 kattyhouse:所以是直接打成single cell就直接種在neurobasal+B27中 11/16 16:36
11F：→ kattyhouse:也不用加ara-C或其他的東西之類的嗎? 11/16 16:37
12F：→ kattyhouse:還是仍然要在含有FBS的貼24hr後才換成neurobasal+B27 11/16 16:38