作者kobeiloveyou (我超強暴)
看板Biotech
標題[討論] BCA定量計算問題
時間Mon Nov 12 19:28:06 2012
大家好
在做BCA時
Standard curve的濃度為2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625 mg/mL
未知濃度的樣品稀釋 2X, 4X, 8X, 16X, 32X, 64X, 128X 這七種稀釋倍率
加reagent後 在37度 反應10分鐘
而這7種稀釋倍率的吸光值 皆能落在standard curve裡的話
將每個稀釋倍率的吸光值 帶入standard curve 在乘回稀釋倍率
理論上 每個濃度要差不多才是
可是卻都不相同
所以想請問
到底要選哪一個稀釋倍率為可信的呢?
還有 請問混和 reagent A和B時 需不需要避光呢?
謝謝大家!!
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◆ From: 140.112.74.19
1F：推 jasonstudio:你如果落在濃度比較低的範圍 就把標準線高濃度的拿掉 11/12 22:34
2F：→ jasonstudio:這是跟拉趨勢線的公式有關 數值越大影響越大 11/12 22:35
3F：→ raiyu:不須避光;另外 我做是37度30min,10分鐘會不會太短? 11/13 04:39
4F：→ kobeiloveyou:所以是要能落在較低濃度的稀釋倍率 比較可信囉? 11/13 10:10
5F：→ kobeiloveyou:請問為啥每種稀釋倍率回乘後 濃度都不一樣? 11/13 10:11
6F：→ kobeiloveyou:10分鐘,我讓最高濃度的Standard吸光到0.9多,就不反應 11/13 10:12
7F：→ jsi:反應要多久說明書裡就有寫，照著做吧~ 11/13 12:38
8F：推 jasonstudio:這樣說好了 你的吸光值最好落在標準曲線的中間 11/13 13:29
9F：→ jasonstudio:這樣會比較準一點 另外你可以用你的樣品吸光值做一條 11/13 13:30
10F：→ jasonstudio:標準線 看是不是稀釋有問題 11/13 13:30