作者kobeiloveyou (我超强暴)
看板Biotech
标题[讨论] BCA定量计算问题
时间Mon Nov 12 19:28:06 2012
大家好
在做BCA时
Standard curve的浓度为2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625 mg/mL
未知浓度的样品稀释 2X, 4X, 8X, 16X, 32X, 64X, 128X 这七种稀释倍率
加reagent後 在37度 反应10分钟
而这7种稀释倍率的吸光值 皆能落在standard curve里的话
将每个稀释倍率的吸光值 带入standard curve 在乘回稀释倍率
理论上 每个浓度要差不多才是
可是却都不相同
所以想请问
到底要选哪一个稀释倍率为可信的呢?
还有 请问混和 reagent A和B时 需不需要避光呢?
谢谢大家!!
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◆ From: 140.112.74.19
1F：推 jasonstudio:你如果落在浓度比较低的范围 就把标准线高浓度的拿掉 11/12 22:34
2F：→ jasonstudio:这是跟拉趋势线的公式有关 数值越大影响越大 11/12 22:35
3F：→ raiyu:不须避光;另外 我做是37度30min,10分钟会不会太短? 11/13 04:39
4F：→ kobeiloveyou:所以是要能落在较低浓度的稀释倍率 比较可信罗? 11/13 10:10
5F：→ kobeiloveyou:请问为啥每种稀释倍率回乘後 浓度都不一样? 11/13 10:11
6F：→ kobeiloveyou:10分钟,我让最高浓度的Standard吸光到0.9多,就不反应 11/13 10:12
7F：→ jsi:反应要多久说明书里就有写，照着做吧~ 11/13 12:38
8F：推 jasonstudio:这样说好了 你的吸光值最好落在标准曲线的中间 11/13 13:29
9F：→ jasonstudio:这样会比较准一点 另外你可以用你的样品吸光值做一条 11/13 13:30
10F：→ jasonstudio:标准线 看是不是稀释有问题 11/13 13:30