作者likemsn (是喜歡msn不是喜歡男生)
看板Biotech
標題Re: [求救] pcr跑膠呈色不均
時間Mon Nov 5 17:36:37 2012
※ 引述《likemsn (是喜歡msn不是喜歡男生)》之銘言：
: 這個...新手小弟上來發問
: 既marker跑不一樣高之後，又遇到跑膠的顏色不一樣
: 不曉得各位能不能理解我的意思
: 就用EtBr染完色後，膠體呈現上面顏色較亮的情形
: 就是在洞口那排較亮
: 可是我明明染色時是平行放入應該不會有染色不均的問題
: 而且有時候會出現有時則否，完全是看天吃飯= =
: 最近則是比較常出現
: 到底是哪個環節出現問題
: 不曉得有沒有好心的大大可以點破癥結點，感恩~
放照片起來麻煩各位大大幫我解惑
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=t7396&b=15&f=1598928636&p=0
再次感謝~^^
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
1F：推 sunnyforever:先確定膠有完全溶解(要搖一搖)並凝固完全(可冰冰箱) 11/05 18:08
2F：→ sunnyforever:EtBr外染液、TAE有定期更新 11/05 18:09
3F：→ sunnyforever:選對適當marker，才不會跑太久使EtBr集中上方 11/05 18:10
請問一下sunny大你的TAE是多久更換一次阿?如果是在每天都跑的情況下
4F：→ nike77114:請把你的狀況詳細敘述一下吧，之前你那篇說用7%agarose 11/05 22:58
5F：→ nike77114:這次的情況是甚麼呢?y 11/05 22:58
n大，這次的情況跟上次一樣，只是放照片起來供大家解惑，因為我也不太確認之前我的
推估是否正確
6F：推 mesenchymal:7%似乎不是原PO推的 11/06 09:10
※ 編輯: likemsn 來自: 210.60.122.160 (11/06 11:28)
7F：推 sunnyforever:一天跑三次,每次30分鐘,約3~4天換一次TAE 11/06 15:25
8F：→ sunnyforever:你可以用血清瓶回收reuse TAE,即可以增加使用次數 11/06 15:26
我不用的TAE都倒掉說，覺得好浪費。那sunny大你所謂的增加使用次數是指?還可以再跑?
9F：→ sunnyforever:可是主要還是要buffer乾淨為主~ 11/06 15:26
10F：→ sunnyforever:如果不裝瓶而放室溫,其水分也會不斷蒸發使濃度改變 11/06 15:27
11F：推 sunnyforever:如果是實驗data,建議還是以新的buffer使用為主 11/06 15:32
12F：→ sunnyforever:剛跑過的buffer建議不要馬上再跑,太熱會不好看~ 11/06 15:34
13F：推 jsi:band都很直看起來很ok，只是你要觀察的band size小，下次可以 11/06 16:10
14F：→ jsi:不要跑那麼下面，就不會糊糊的。此外，膠上方染得比較亮並不影 11/06 16:13
15F：→ jsi:響結果觀察，下次你跑短時間染色看看，應該亮的區域會比現在大 11/06 16:20
16F：→ jsi:(如果內染的話)。千萬別因此一直卡在這裡~ 11/06 16:30
回j大，因為我們家老闆是求好心切型的，所以還是希望跑出來能漂亮。如果是短時間
染色怕出來的band就沒那麼亮
※ 編輯: likemsn 來自: 210.60.122.160 (11/06 17:00)
17F：推 sunnyforever:我的意思是 跑完一次後 若當天沒有要再跑 11/06 19:58
18F：→ sunnyforever:即可將TAE倒入瓶內鎖緊 避免水分蒸發 11/06 19:59
19F：→ sunnyforever:如此可減少鹽類濃度改變的程度 11/06 19:59
20F：→ sunnyforever:如果真的想要好看 那建議還是用內染的方式 11/06 20:00
21F：→ sunnyforever:殘留的EtBr用酒精或照光都可以去除 並沒有那麼可怕 11/06 20:00
22F：→ sunnyforever:如果真的要跑很久 TBE也可以列入考慮了 11/06 20:03
感謝sunny大不厭其煩說明，小弟會依照您指示的方法試試~^^
※ 編輯: likemsn 來自: 1.160.236.179 (11/06 21:50)
23F：→ nike77114:你可以染久一點。然後再用水退染，另外膠不要鑄太厚也是 11/06 22:38
24F：→ nike77114:可以試試看 11/06 22:38
25F：→ enjorus:看起來是褪染有問題. 所以背景值過高 12/19 13:58