作者likemsn (是喜欢msn不是喜欢男生)
看板Biotech
标题Re: [求救] pcr跑胶呈色不均
时间Mon Nov 5 17:36:37 2012
※ 引述《likemsn (是喜欢msn不是喜欢男生)》之铭言：
: 这个...新手小弟上来发问
: 既marker跑不一样高之後，又遇到跑胶的颜色不一样
: 不晓得各位能不能理解我的意思
: 就用EtBr染完色後，胶体呈现上面颜色较亮的情形
: 就是在洞口那排较亮
: 可是我明明染色时是平行放入应该不会有染色不均的问题
: 而且有时候会出现有时则否，完全是看天吃饭= =
: 最近则是比较常出现
: 到底是哪个环节出现问题
: 不晓得有没有好心的大大可以点破症结点，感恩~
放照片起来麻烦各位大大帮我解惑
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=t7396&b=15&f=1598928636&p=0
再次感谢~^^
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
1F：推 sunnyforever:先确定胶有完全溶解(要摇一摇)并凝固完全(可冰冰箱) 11/05 18:08
2F：→ sunnyforever:EtBr外染液、TAE有定期更新 11/05 18:09
3F：→ sunnyforever:选对适当marker，才不会跑太久使EtBr集中上方 11/05 18:10
请问一下sunny大你的TAE是多久更换一次阿?如果是在每天都跑的情况下
4F：→ nike77114:请把你的状况详细叙述一下吧，之前你那篇说用7%agarose 11/05 22:58
5F：→ nike77114:这次的情况是甚麽呢?y 11/05 22:58
n大，这次的情况跟上次一样，只是放照片起来供大家解惑，因为我也不太确认之前我的
推估是否正确
6F：推 mesenchymal:7%似乎不是原PO推的 11/06 09:10
※ 编辑: likemsn 来自: 210.60.122.160 (11/06 11:28)
7F：推 sunnyforever:一天跑三次,每次30分钟,约3~4天换一次TAE 11/06 15:25
8F：→ sunnyforever:你可以用血清瓶回收reuse TAE,即可以增加使用次数 11/06 15:26
我不用的TAE都倒掉说，觉得好浪费。那sunny大你所谓的增加使用次数是指?还可以再跑?
9F：→ sunnyforever:可是主要还是要buffer乾净为主~ 11/06 15:26
10F：→ sunnyforever:如果不装瓶而放室温,其水分也会不断蒸发使浓度改变 11/06 15:27
11F：推 sunnyforever:如果是实验data,建议还是以新的buffer使用为主 11/06 15:32
12F：→ sunnyforever:刚跑过的buffer建议不要马上再跑,太热会不好看~ 11/06 15:34
13F：推 jsi:band都很直看起来很ok，只是你要观察的band size小，下次可以 11/06 16:10
14F：→ jsi:不要跑那麽下面，就不会糊糊的。此外，胶上方染得比较亮并不影 11/06 16:13
15F：→ jsi:响结果观察，下次你跑短时间染色看看，应该亮的区域会比现在大 11/06 16:20
16F：→ jsi:(如果内染的话)。千万别因此一直卡在这里~ 11/06 16:30
回j大，因为我们家老板是求好心切型的，所以还是希望跑出来能漂亮。如果是短时间
染色怕出来的band就没那麽亮
※ 编辑: likemsn 来自: 210.60.122.160 (11/06 17:00)
17F：推 sunnyforever:我的意思是 跑完一次後 若当天没有要再跑 11/06 19:58
18F：→ sunnyforever:即可将TAE倒入瓶内锁紧 避免水分蒸发 11/06 19:59
19F：→ sunnyforever:如此可减少盐类浓度改变的程度 11/06 19:59
20F：→ sunnyforever:如果真的想要好看 那建议还是用内染的方式 11/06 20:00
21F：→ sunnyforever:残留的EtBr用酒精或照光都可以去除 并没有那麽可怕 11/06 20:00
22F：→ sunnyforever:如果真的要跑很久 TBE也可以列入考虑了 11/06 20:03
感谢sunny大不厌其烦说明，小弟会依照您指示的方法试试~^^
※ 编辑: likemsn 来自: 1.160.236.179 (11/06 21:50)
23F：→ nike77114:你可以染久一点。然後再用水退染，另外胶不要铸太厚也是 11/06 22:38
24F：→ nike77114:可以试试看 11/06 22:38
25F：→ enjorus:看起来是褪染有问题. 所以背景值过高 12/19 13:58