作者menemo (menemo)
看板Biotech
標題[求救] beta-actin 有兩條
時間Wed Oct 24 18:35:40 2012
最近開始做western blot 發現壓出來的beta-actin都是兩條
之前還有過第一次壓出來是一條
隔天同樣sample拿出來在跑一次電泳又變成兩條
http://ppt.cc/Vxh~
上面是第一次壓出來的 下面的是重新跑過電泳壓出來的
用PVDF膜 使用Millipore的beta-actin
一抗為1:400000 室溫下兩小時
二抗為1:20000 室溫下一小時
實驗室學姊也是過同樣方法 從來沒這個問題
推測問題可能是在sample本身（細胞）或者是自己實驗手法
不知道有沒有人也有過這樣的困擾？ 謝謝大家
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.67.123
1F：推 alaric:sample denatured 有不同? 10/24 19:44
3F：→ Ice9:你的一抗稀釋倍率這麼高喔？ 抗體 reused 後曾有過類似問題。 10/25 11:36
4F：→ menemo:SAMPLE BUFFER是原本已經配好 要跑電泳前拿出來用 10/25 22:55
5F：→ menemo:可能就差在煮的時間不一樣 但是大概都控制在6~8分鐘 10/25 22:56
6F：→ menemo:dye的問題我也想過 可是學姊也都用同一罐 偏偏她的就正常 10/25 22:57
7F：→ menemo:這隻beta-actin蠻強的 所以才稀釋這麼多 10/25 22:59
8F：推 mesenchymal:你壓片時間多少? 10/26 10:49
9F：推 vandia:這隻抗體超強,我們2萬倍只需要呈色3秒 10/26 23:04
10F：推 jabari:謝謝推薦@w@一隻好抗體能撐好久 XD~~ 10/26 23:27
11F：推 Ice9:謝謝推薦。 10/31 12:36
12F：→ menemo:我要壓個30秒才會有影像出來～ 10/31 21:44