作者menemo (menemo)
看板Biotech
标题[求救] beta-actin 有两条
时间Wed Oct 24 18:35:40 2012
最近开始做western blot 发现压出来的beta-actin都是两条
之前还有过第一次压出来是一条
隔天同样sample拿出来在跑一次电泳又变成两条
http://ppt.cc/Vxh~
上面是第一次压出来的 下面的是重新跑过电泳压出来的
用PVDF膜 使用Millipore的beta-actin
一抗为1:400000 室温下两小时
二抗为1:20000 室温下一小时
实验室学姊也是过同样方法 从来没这个问题
推测问题可能是在sample本身（细胞）或者是自己实验手法
不知道有没有人也有过这样的困扰？ 谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.67.123
1F：推 alaric:sample denatured 有不同? 10/24 19:44
3F：→ Ice9:你的一抗稀释倍率这麽高喔？ 抗体 reused 後曾有过类似问题。 10/25 11:36
4F：→ menemo:SAMPLE BUFFER是原本已经配好 要跑电泳前拿出来用 10/25 22:55
5F：→ menemo:可能就差在煮的时间不一样 但是大概都控制在6~8分钟 10/25 22:56
6F：→ menemo:dye的问题我也想过 可是学姊也都用同一罐 偏偏她的就正常 10/25 22:57
7F：→ menemo:这只beta-actin蛮强的 所以才稀释这麽多 10/25 22:59
8F：推 mesenchymal:你压片时间多少? 10/26 10:49
9F：推 vandia:这只抗体超强,我们2万倍只需要呈色3秒 10/26 23:04
10F：推 jabari:谢谢推荐@w@一只好抗体能撑好久 XD~~ 10/26 23:27
11F：推 Ice9:谢谢推荐。 10/31 12:36
12F：→ menemo:我要压个30秒才会有影像出来～ 10/31 21:44