作者ballycotton7 (昂 布拉股)
看板Biotech
標題[求救] 小鼠眼球冷凍切片
時間Fri Oct 12 23:40:00 2012
板上各位先進大家好
最近在做小鼠眼球的冷凍切片
主要目的是觀察水晶體
但是切片時 水晶體一直會皺縮成一團掉下來
私以為可能問題出在固定包埋的過程
因為眼球本身含水量就很多
以下列出我大概的處理步驟 希望有經驗的朋友可以給點建議
感謝!!
1.取下眼球 先以PBS浸洗過後 放在4% paraformaldehyde 固定overnight 4度C
2.隔天進行蔗糖序列脫水 5% sucrose in PBS 1h
10% sucrose in PBS 1h
30% sucrose in PBS O/N
3.浸泡1:1/30% sucrose:30% OCT in PBS 3h
4.OCT包埋 切片
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 124.218.68.208
1F：推 caesar0926:lens 感覺就超難切的!!!!!!!! 10/13 00:09
2F：→ caesar0926:不知道 你冷切有成功切出完整的過嗎? 10/13 00:10
3F：→ caesar0926:我是整顆眼球脫水後石蠟包埋 粗切後泡冰塊水4度c 10/13 00:11
4F：→ caesar0926:至少六小時 讓LENS軟一點後切有時可以切出完整的lens 10/13 00:11
5F：→ caesar0926:但我只要是看cornea 所以lens完整性沒有很注意觀察 10/13 00:12
6F：→ caesar0926:但切5mm 可以看出整顆眼球中間有一塊透明薄膜 10/13 00:13
7F：→ ballycotton7:他是可以切下來 可是都會皺掉 10/13 02:12
8F：→ ballycotton7:lens本身周圍水就很多 如果沒有其他組織撐著他 10/13 02:13
9F：→ ballycotton7:很容易len自己就先捲起來 10/13 02:13
10F：→ ballycotton7:如果只看Cornea的話 眼球取下直接丟OCT包埋 Cornea其 10/13 02:14
11F：→ ballycotton7:還蠻完整的 不像lens這麼麻煩 10/13 02:15
12F：推 allisa:我之前是不脫水直接切 會有完整的lens 10/14 03:42
13F：推 vandia:我記得軟組織的冷凍切片,溫度是不是要調高一點,然後切厚點? 10/14 21:42