作者ballycotton7 (昂 布拉股)
看板Biotech
标题[求救] 小鼠眼球冷冻切片
时间Fri Oct 12 23:40:00 2012
板上各位先进大家好
最近在做小鼠眼球的冷冻切片
主要目的是观察水晶体
但是切片时 水晶体一直会皱缩成一团掉下来
私以为可能问题出在固定包埋的过程
因为眼球本身含水量就很多
以下列出我大概的处理步骤 希望有经验的朋友可以给点建议
感谢!!
1.取下眼球 先以PBS浸洗过後 放在4% paraformaldehyde 固定overnight 4度C
2.隔天进行蔗糖序列脱水 5% sucrose in PBS 1h
10% sucrose in PBS 1h
30% sucrose in PBS O/N
3.浸泡1:1/30% sucrose:30% OCT in PBS 3h
4.OCT包埋 切片
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 124.218.68.208
1F：推 caesar0926:lens 感觉就超难切的!!!!!!!! 10/13 00:09
2F：→ caesar0926:不知道 你冷切有成功切出完整的过吗? 10/13 00:10
3F：→ caesar0926:我是整颗眼球脱水後石蜡包埋 粗切後泡冰块水4度c 10/13 00:11
4F：→ caesar0926:至少六小时 让LENS软一点後切有时可以切出完整的lens 10/13 00:11
5F：→ caesar0926:但我只要是看cornea 所以lens完整性没有很注意观察 10/13 00:12
6F：→ caesar0926:但切5mm 可以看出整颗眼球中间有一块透明薄膜 10/13 00:13
7F：→ ballycotton7:他是可以切下来 可是都会皱掉 10/13 02:12
8F：→ ballycotton7:lens本身周围水就很多 如果没有其他组织撑着他 10/13 02:13
9F：→ ballycotton7:很容易len自己就先卷起来 10/13 02:13
10F：→ ballycotton7:如果只看Cornea的话 眼球取下直接丢OCT包埋 Cornea其 10/13 02:14
11F：→ ballycotton7:还蛮完整的 不像lens这麽麻烦 10/13 02:15
12F：推 allisa:我之前是不脱水直接切 会有完整的lens 10/14 03:42
13F：推 vandia:我记得软组织的冷冻切片,温度是不是要调高一点,然後切厚点? 10/14 21:42