作者smallmin (小名)
站內Biotech
標題請問抽E. coli plasmid
時間Sun Sep 30 10:48:29 2012
我用含抗生素LB 37度 震盪培養E. coli overnight
我個人經驗是培養12~16小時
盡量不要超過16小時
因為超過stationary phase後E. coli會快速死亡
所以在12~16小時之間 也就是log phase階段可以放4~8度C冰箱
在冰箱內放5個小時內再抽影響不大
可是我學姊說寧可37度養超過16小時也絕對不可以放冰箱
放冰箱後細菌會快速lysis導致抽不出來
請問大家的經驗overnight培養後是否可以放冰箱靜置?
附上我的protocol
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/0471142727.mb0106s15/pdf
我是參考current protocol操作
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.24.5
1F：→ skybreeze:我以往是前一天養 然後早上到實驗室transfer 下午抽 09/30 11:02
2F：→ skybreeze:這樣就不存在養過久或者放冰箱的問題 09/30 11:03
3F：推 Realthugz:看plasmid 有的要盡量fresh 有的4度或離下來冷凍都沒差 09/30 11:10
4F：→ a90648:我的經驗是離下來凍-20，隔天抽沒問題，但還是建議現抽 09/30 16:18
5F：推 spirithorse:建議pellet冰-20 09/30 16:53
6F：→ smallmin:我個人經驗放4度C 5小時內影響不大 請問大家的經驗影響大 09/30 18:25
7F：→ smallmin:嗎? 09/30 18:25
8F：推 leoblack:推pellet冰-20~ 10/01 01:06
9F：推 mesenchymal:推pellet冰-20~ 但要記得抽,看過有人冰一堆忘記抽... 10/01 03:09
10F：推 joseph103331:放室溫 早上放到下午還是可以抽 10/01 20:34
11F：→ joseph103331:在Broth的情況下4度菌會死掉 放室溫不震盪我覺得較好 10/01 20:35
12F：→ Blackin:離下來冰-20之後再抽 和放桌上(室溫)8HR都抽過 沒什麼差 10/04 11:19