作者smallmin (小名)
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标题请问抽E. coli plasmid
时间Sun Sep 30 10:48:29 2012
我用含抗生素LB 37度 震荡培养E. coli overnight
我个人经验是培养12~16小时
尽量不要超过16小时
因为超过stationary phase後E. coli会快速死亡
所以在12~16小时之间 也就是log phase阶段可以放4~8度C冰箱
在冰箱内放5个小时内再抽影响不大
可是我学姊说宁可37度养超过16小时也绝对不可以放冰箱
放冰箱後细菌会快速lysis导致抽不出来
请问大家的经验overnight培养後是否可以放冰箱静置?
附上我的protocol
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/0471142727.mb0106s15/pdf
我是参考current protocol操作
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.24.5
1F：→ skybreeze:我以往是前一天养 然後早上到实验室transfer 下午抽 09/30 11:02
2F：→ skybreeze:这样就不存在养过久或者放冰箱的问题 09/30 11:03
3F：推 Realthugz:看plasmid 有的要尽量fresh 有的4度或离下来冷冻都没差 09/30 11:10
4F：→ a90648:我的经验是离下来冻-20，隔天抽没问题，但还是建议现抽 09/30 16:18
5F：推 spirithorse:建议pellet冰-20 09/30 16:53
6F：→ smallmin:我个人经验放4度C 5小时内影响不大 请问大家的经验影响大 09/30 18:25
7F：→ smallmin:吗? 09/30 18:25
8F：推 leoblack:推pellet冰-20~ 10/01 01:06
9F：推 mesenchymal:推pellet冰-20~ 但要记得抽,看过有人冰一堆忘记抽... 10/01 03:09
10F：推 joseph103331:放室温 早上放到下午还是可以抽 10/01 20:34
11F：→ joseph103331:在Broth的情况下4度菌会死掉 放室温不震荡我觉得较好 10/01 20:35
12F：→ Blackin:离下来冰-20之後再抽 和放桌上(室温)8HR都抽过 没什麽差 10/04 11:19