作者dogan (豆干)
看板Biotech
標題[討論] transfection的步驟
時間Tue Sep 25 23:39:14 2012
不好意思打擾大家 在當summer的時候
因為做transfection而有一些步驟上的問題
通常DNA 和lipofetamine 都要先各自加上opti-MEM稀釋過之後
再加在一起，而且lipofectamine protocol上也說lipofectamine就是要先dilute
可是原理是為什麼，或者可能是因為什麼原因影響到實驗結果
我的想法是這樣：
我要做六組不同長度的promoter轉染
所以我就把全部要加的opti-MEM總量600ul
和lipofectamine7.5ul都先加入同一管中
後來在各自trasfer適量到個小管，再分別加入DNA
可是最後因為老師說不行我還是乖乖分開dilute然後再混合
所以也沒有機會映證上述可能會造成的誤差結果
想問問一下板上經驗豐富的各位的意見。
懇請大家幫我解惑
感謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.212.244
1F：→ RickyKckao:lipo和DNA比例要適當 DNA才比較容易進去lipo 且lipo很 09/25 23:57
2F：→ RickyKckao:容易附著在塑膠管壁上 所以在dilute的時候要確實加到op 09/25 23:58
3F：→ RickyKckao:ti-MEM裡面. Protocol裡面也有列出多少DNA用多少lipo的 09/25 23:59
4F：→ RickyKckao:table 用意就是在最佳化lipo:DNA的比例 不過隨著transf 09/26 00:00
5F：→ RickyKckao:ection細胞的不同 通常最佳的比例也不同 那就要多試試 09/26 00:01
6F：→ RickyKckao:嘍~ 另外我以前做也是像你一樣配stock 但並沒有甚麼問 09/26 00:02
7F：→ RickyKckao:題呀@@ 我覺得只要確實把lipo+opti-MEM和DNA+opti-MEM 09/26 00:03
8F：→ RickyKckao:分開配 應該是不會有問題 09/26 00:03
9F：推 Realthugz:沒問題+1 09/26 00:22
10F：→ dogan:謝謝各位回答，但我的問題是為什麼一定要分開DILUTE我不能 09/26 00:29
11F：→ dogan:把COMMON的東西加完之後TRANSFER之後在各加入dna嗎 09/26 00:30
12F：→ RickyKckao:DNA跟lipo分別dilute後再混和 DNA和lipo接觸的比例較均 09/26 00:36
13F：→ dogan:我曉得LIPO和dna會有一個OPTIMAL的比例是要試的，可是我想現 09/26 00:37
14F：→ RickyKckao:勻 想想通常要加入的DNA濃度是較高的 雖然加入total溶 09/26 00:37
15F：→ RickyKckao:液之後就會被稀釋, 但是在加入的那一瞬間 是很濃的DNA 09/26 00:38
16F：→ RickyKckao:去接觸到lipo 這樣並不有利於DNA進入lipo 09/26 00:39
17F：→ dogan:恩 有道理 !!謝謝你喔 我會繼續去網路上找相關資料 若有什 09/26 00:41
18F：→ dogan:麼新的想法和意見麻煩再告訴我 感謝! 09/26 00:41
19F：→ RickyKckao:也可能造成每個lipo帶的DNA量差異大 有的沒有 有的很多 09/26 00:42
20F：→ dogan:那請問 LIPOFECTAMINE DILUTE之後室溫下INCUBATE 5MINS 09/26 00:51
21F：→ dogan:只是為了要讓他SUSPEND均勻而已嗎還是有其他意義? 09/26 00:52
22F：→ RickyKckao:我也想過這個問題 但除了讓它均勻 我想不出其他理由@@ 09/26 01:00
23F：→ RickyKckao:商業機密吧 哈哈 09/26 01:00
24F：→ dogan:@@ 難怪我一直查書查網路都沒有 嗯 今天麻煩你了 THX! 09/26 01:05