作者dogan (豆干)
看板Biotech
标题[讨论] transfection的步骤
时间Tue Sep 25 23:39:14 2012
不好意思打扰大家 在当summer的时候
因为做transfection而有一些步骤上的问题
通常DNA 和lipofetamine 都要先各自加上opti-MEM稀释过之後
再加在一起，而且lipofectamine protocol上也说lipofectamine就是要先dilute
可是原理是为什麽，或者可能是因为什麽原因影响到实验结果
我的想法是这样：
我要做六组不同长度的promoter转染
所以我就把全部要加的opti-MEM总量600ul
和lipofectamine7.5ul都先加入同一管中
後来在各自trasfer适量到个小管，再分别加入DNA
可是最後因为老师说不行我还是乖乖分开dilute然後再混合
所以也没有机会映证上述可能会造成的误差结果
想问问一下板上经验丰富的各位的意见。
恳请大家帮我解惑
感谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.212.244
1F：→ RickyKckao:lipo和DNA比例要适当 DNA才比较容易进去lipo 且lipo很 09/25 23:57
2F：→ RickyKckao:容易附着在塑胶管壁上 所以在dilute的时候要确实加到op 09/25 23:58
3F：→ RickyKckao:ti-MEM里面. Protocol里面也有列出多少DNA用多少lipo的 09/25 23:59
4F：→ RickyKckao:table 用意就是在最佳化lipo:DNA的比例 不过随着transf 09/26 00:00
5F：→ RickyKckao:ection细胞的不同 通常最佳的比例也不同 那就要多试试 09/26 00:01
6F：→ RickyKckao:喽~ 另外我以前做也是像你一样配stock 但并没有甚麽问 09/26 00:02
7F：→ RickyKckao:题呀@@ 我觉得只要确实把lipo+opti-MEM和DNA+opti-MEM 09/26 00:03
8F：→ RickyKckao:分开配 应该是不会有问题 09/26 00:03
9F：推 Realthugz:没问题+1 09/26 00:22
10F：→ dogan:谢谢各位回答，但我的问题是为什麽一定要分开DILUTE我不能 09/26 00:29
11F：→ dogan:把COMMON的东西加完之後TRANSFER之後在各加入dna吗 09/26 00:30
12F：→ RickyKckao:DNA跟lipo分别dilute後再混和 DNA和lipo接触的比例较均 09/26 00:36
13F：→ dogan:我晓得LIPO和dna会有一个OPTIMAL的比例是要试的，可是我想现 09/26 00:37
14F：→ RickyKckao:匀 想想通常要加入的DNA浓度是较高的 虽然加入total溶 09/26 00:37
15F：→ RickyKckao:液之後就会被稀释, 但是在加入的那一瞬间 是很浓的DNA 09/26 00:38
16F：→ RickyKckao:去接触到lipo 这样并不有利於DNA进入lipo 09/26 00:39
17F：→ dogan:恩 有道理 !!谢谢你喔 我会继续去网路上找相关资料 若有什 09/26 00:41
18F：→ dogan:麽新的想法和意见麻烦再告诉我 感谢! 09/26 00:41
19F：→ RickyKckao:也可能造成每个lipo带的DNA量差异大 有的没有 有的很多 09/26 00:42
20F：→ dogan:那请问 LIPOFECTAMINE DILUTE之後室温下INCUBATE 5MINS 09/26 00:51
21F：→ dogan:只是为了要让他SUSPEND均匀而已吗还是有其他意义? 09/26 00:52
22F：→ RickyKckao:我也想过这个问题 但除了让它均匀 我想不出其他理由@@ 09/26 01:00
23F：→ RickyKckao:商业机密吧 哈哈 09/26 01:00
24F：→ dogan:@@ 难怪我一直查书查网路都没有 嗯 今天麻烦你了 THX! 09/26 01:05