作者otneiv (oleic)
看板Biotech
標題[求救] 關於RNA照膠
時間Thu Sep 20 10:30:33 2012
想請問一下 當我萃取出total RNA之後 為什麼跑膠(還是用跑RNA專用的膠)的結果卻看不
到?
可是將其SAMPLE轉成cDNA之後 跑膠 卻可以看到有smear的現象
我目前的實驗流程:
取血離心→取中間層 (白血球 血小板)→用 RNeasy mini kit 萃取RNA
(5 CC) (每管50ul)
利用Formaldehyde-Free RNA Gel Kit 來跑RNA電泳 (SAMPLE量為5uL)
跑膠的時間為15分鐘
(連MARKER都跑不出來 Marker是使用1Kb DNA ladder (同樣使用染RNA的 loading
buffer)
可是使用跑DNA電泳的膠 以及SYBR Green I來染 卻可以照出有兩條明顯的band (雖然很
淡)
照膠的機器為Vilber Lourmat出廠的
http://www.vilber.com/products/Bioprint1.html (應該是這台)
麻煩大家 幫我想想看有什麼原因了!! 謝謝
因為也做了不下十次的測試 沒有看到過任何一次 總不可能手殘了十次吧(冏)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.2.84
1F：→ otneiv:抽出來的RNA 經過nanodrop的偵測 260/280皆在1.70~2.1內 09/20 10:41
2F：→ soom:看起來像是染RNA的dye有問題 09/20 10:52
3F：→ elite2:(SAMPLE量為5uL)，重點是裡面有多少RNA呢？ 09/20 12:01
4F：→ otneiv:5~30ng/ul 不等(nanodrop所測得的數據) 09/20 12:22
5F：→ otneiv:染RNA的dye 已經包含在loading buffer裡了 09/20 12:24
7F：→ Ianthegood:應該是dye的問題+1 不過重點是你要幹嘛吧 09/20 16:07
8F：→ Ianthegood:如果只是要跑check 一般的膠多放點EtBr就看得到了 09/20 16:07
9F：→ otneiv:因為實驗室是第一次做RNA項目 老闆想試試看 以實驗室的情況 09/20 19:51
10F：→ otneiv:是否可以做RNA相關的題目 因此想利用RNA的膠來確認看看 所 09/20 19:52
11F：→ otneiv:萃取的RNA結果如何! (雖然OD 260/280幾乎都有在1.8~2.1間) 09/20 19:52
12F：→ otneiv:EtBr的話 實驗室好像也沒有在用 而且照GEL的PROTOCOL 應該 09/20 19:54
13F：→ otneiv:是使用他所提供的loading buffer就能染出來的! 09/20 19:54
14F：→ otneiv:我會再問問看廠商dye的相關問題 感謝你們的幫忙!! 09/20 19:55
15F：推 tommy770726:不清楚最後再泡個ETBR 10分鐘就好了 09/22 22:22
16F：→ tommy770726:還有原PO的dye有加甘油嗎? 沒有甘油RNA會飄掉喔 09/22 22:23