作者otneiv (oleic)
看板Biotech
标题[求救] 关於RNA照胶
时间Thu Sep 20 10:30:33 2012
想请问一下 当我萃取出total RNA之後 为什麽跑胶(还是用跑RNA专用的胶)的结果却看不
到?
可是将其SAMPLE转成cDNA之後 跑胶 却可以看到有smear的现象
我目前的实验流程:
取血离心→取中间层 (白血球 血小板)→用 RNeasy mini kit 萃取RNA
(5 CC) (每管50ul)
利用Formaldehyde-Free RNA Gel Kit 来跑RNA电泳 (SAMPLE量为5uL)
跑胶的时间为15分钟
(连MARKER都跑不出来 Marker是使用1Kb DNA ladder (同样使用染RNA的 loading
buffer)
可是使用跑DNA电泳的胶 以及SYBR Green I来染 却可以照出有两条明显的band (虽然很
淡)
照胶的机器为Vilber Lourmat出厂的
http://www.vilber.com/products/Bioprint1.html (应该是这台)
麻烦大家 帮我想想看有什麽原因了!! 谢谢
因为也做了不下十次的测试 没有看到过任何一次 总不可能手残了十次吧(冏)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.2.84
1F：→ otneiv:抽出来的RNA 经过nanodrop的侦测 260/280皆在1.70~2.1内 09/20 10:41
2F：→ soom:看起来像是染RNA的dye有问题 09/20 10:52
3F：→ elite2:(SAMPLE量为5uL)，重点是里面有多少RNA呢？ 09/20 12:01
4F：→ otneiv:5~30ng/ul 不等(nanodrop所测得的数据) 09/20 12:22
5F：→ otneiv:染RNA的dye 已经包含在loading buffer里了 09/20 12:24
7F：→ Ianthegood:应该是dye的问题+1 不过重点是你要干嘛吧 09/20 16:07
8F：→ Ianthegood:如果只是要跑check 一般的胶多放点EtBr就看得到了 09/20 16:07
9F：→ otneiv:因为实验室是第一次做RNA项目 老板想试试看 以实验室的情况 09/20 19:51
10F：→ otneiv:是否可以做RNA相关的题目 因此想利用RNA的胶来确认看看 所 09/20 19:52
11F：→ otneiv:萃取的RNA结果如何! (虽然OD 260/280几乎都有在1.8~2.1间) 09/20 19:52
12F：→ otneiv:EtBr的话 实验室好像也没有在用 而且照GEL的PROTOCOL 应该 09/20 19:54
13F：→ otneiv:是使用他所提供的loading buffer就能染出来的! 09/20 19:54
14F：→ otneiv:我会再问问看厂商dye的相关问题 感谢你们的帮忙!! 09/20 19:55
15F：推 tommy770726:不清楚最後再泡个ETBR 10分钟就好了 09/22 22:22
16F：→ tommy770726:还有原PO的dye有加甘油吗? 没有甘油RNA会飘掉喔 09/22 22:23