作者tabo1989 (向日葵大燦笑)
看板Biotech
標題[方法] ligation
時間Sun Sep 2 23:11:03 2012
請問做ligation時一直挑到空的vector要怎麼調整condition? 我的條件是（1）vector+insert=100 ng(2)(vector/mw):(insert/mw)=1:3,1:5,1:7我都試過了
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◆ From: 49.215.249.144
1F：→ soom:加做alkaline phosphatase (CIP) 可能有幫助 09/02 23:15
2F：→ RickyKckao:可以試試ligation的時候加polyethylene glycol (PEG) 09/02 23:48
3F：→ jihyang:我用 alkaline phosphatase 做出來的clone都怪怪的說... 09/03 09:16
4F：→ jihyang:vector+insert =1:3 (total 200ng)4度C ligation O/N 試試 09/03 09:17
5F：→ jihyang:可能就最後挑多一點吧.. 之前經驗 一次挑了25個 一次7個就 09/03 09:17
6F：→ jihyang:有了... 頗運氣的 ~ 可以找新手 會有新手運XD 09/03 09:18
7F：→ tabo1989:我有加CIP,但看起來都不work. 09/03 10:36
8F：→ tabo1989:都放室溫下，overweekend 09/03 10:36
9F：→ tabo1989:哈哈哈！挑好久（（淚... 09/03 10:39
10F：→ spirithorse:ligate過周末的話還是放4度比較好,有跑膠確定vector 09/03 16:40
11F：→ spirithorse:有沒有切乾淨嗎? plate上的colony是否爆炸多(plasmid) 09/03 16:41