作者storm780121 (魚頭)
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標題[求救] 關於SDS-PAGE 大於約72kD的蛋白跑不開...
時間Sat Aug 18 00:26:42 2012
大家晚安
小弟最近開始進行蛋白質相關的實驗
不過最近不是很順.....
就是在跑SDS-PAGE時分子量在72kD以上的蛋白跑不開
都聚集成一條線 (marker也是)
但是在72kD以下的部分都很正常
後來我把buffer全部重配 pH重調 (上膠6.8 下膠8.8)
不過還是有一樣的狀況出現
想請問一下還有哪邊需要注意的呢?
謝謝大家
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.48.100
1F：推 qiet:幾%的gel? 08/18 00:49
2F：→ storm780121:12% 08/18 01:28
3F：→ storm780121:膠圖看起來像是72kD以上的蛋白全部被壓成一條線...... 08/18 01:31
4F：→ storm780121:然後這條線大概壓在下膠靠近中間的位置...... 08/18 01:33
5F：推 qqmango:降gel的% 08/18 02:08
6F：→ jabari:降%數 .. 跑久一點@@? sample煮久一點 @w@" 想不到了 08/18 02:39
7F：推 dennisyoung7:72KD以上要很低濃度的膠吧 08/18 05:36
8F：→ aeeaee1128:buffer有加SDS嗎? 08/18 07:31
9F：推 kenseifan:跑大片的膠 08/18 07:34
10F：→ williamyang:要看大範圍的話就用gradient的gel囉 08/18 08:41
11F：→ storm780121:謝謝大家~ 目前降%數跑跑看!! 08/18 11:42
剛剛換成10%的膠再跑一次
結果merker的部分 72kD和95kD黏在一起分不開..... 其他部分正常
sample的部分也是72kD以上黏在一起.....
然後buffer有加0.1% SDS
雖然我的蛋白才50幾kD
不過膠跑完長這樣實在是不好看.....
不知道還需要注意哪些地方.....
謝謝大家!!!
ps. 膠在跑的時候72kD那邊有看到一條透明的線 通電的時候會跟著動
不知道這條線是哪來的 ="=
※ 編輯: storm780121 來自: 140.116.48.100 (08/18 12:30)
12F：推 Realthugz:你有看書照建議配膠嗎? 08/18 12:53
13F：→ blence:收的時候留下帶有marker的膠圖,有圖比較知道是怎樣 08/18 12:53
14F：推 crazybrian:我之前也有這樣的問題 一模一樣!!! 08/18 16:06
15F：→ crazybrian:結果發現是running buffer的問題!!! SDS那邊濃度有配錯 08/18 16:06
16F：→ crazybrian:你可以再重配看看! 找一些網路上面的配方是否跟你一樣 08/18 16:07
17F：→ lask:感覺是SDS的問題 08/18 23:34
18F：→ storm780121:謝謝大家~ 問題在所有buffer重配後已經解決了~ 08/19 17:25