作者storm780121 (鱼头)
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标题[求救] 关於SDS-PAGE 大於约72kD的蛋白跑不开...
时间Sat Aug 18 00:26:42 2012
大家晚安
小弟最近开始进行蛋白质相关的实验
不过最近不是很顺.....
就是在跑SDS-PAGE时分子量在72kD以上的蛋白跑不开
都聚集成一条线 (marker也是)
但是在72kD以下的部分都很正常
後来我把buffer全部重配 pH重调 (上胶6.8 下胶8.8)
不过还是有一样的状况出现
想请问一下还有哪边需要注意的呢?
谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.48.100
1F：推 qiet:几%的gel? 08/18 00:49
2F：→ storm780121:12% 08/18 01:28
3F：→ storm780121:胶图看起来像是72kD以上的蛋白全部被压成一条线...... 08/18 01:31
4F：→ storm780121:然後这条线大概压在下胶靠近中间的位置...... 08/18 01:33
5F：推 qqmango:降gel的% 08/18 02:08
6F：→ jabari:降%数 .. 跑久一点@@? sample煮久一点 @w@" 想不到了 08/18 02:39
7F：推 dennisyoung7:72KD以上要很低浓度的胶吧 08/18 05:36
8F：→ aeeaee1128:buffer有加SDS吗? 08/18 07:31
9F：推 kenseifan:跑大片的胶 08/18 07:34
10F：→ williamyang:要看大范围的话就用gradient的gel罗 08/18 08:41
11F：→ storm780121:谢谢大家~ 目前降%数跑跑看!! 08/18 11:42
刚刚换成10%的胶再跑一次
结果merker的部分 72kD和95kD黏在一起分不开..... 其他部分正常
sample的部分也是72kD以上黏在一起.....
然後buffer有加0.1% SDS
虽然我的蛋白才50几kD
不过胶跑完长这样实在是不好看.....
不知道还需要注意哪些地方.....
谢谢大家!!!
ps. 胶在跑的时候72kD那边有看到一条透明的线 通电的时候会跟着动
不知道这条线是哪来的 ="=
※ 编辑: storm780121 来自: 140.116.48.100 (08/18 12:30)
12F：推 Realthugz:你有看书照建议配胶吗? 08/18 12:53
13F：→ blence:收的时候留下带有marker的胶图,有图比较知道是怎样 08/18 12:53
14F：推 crazybrian:我之前也有这样的问题 一模一样!!! 08/18 16:06
15F：→ crazybrian:结果发现是running buffer的问题!!! SDS那边浓度有配错 08/18 16:06
16F：→ crazybrian:你可以再重配看看! 找一些网路上面的配方是否跟你一样 08/18 16:07
17F：→ lask:感觉是SDS的问题 08/18 23:34
18F：→ storm780121:谢谢大家~ 问题在所有buffer重配後已经解决了~ 08/19 17:25