作者likemsn (是喜歡msn不是喜歡男生)
看板Biotech
標題[求救] pcr跑膠呈色不均
時間Tue Aug 14 16:43:54 2012
這個...新手小弟上來發問
既marker跑不一樣高之後，又遇到跑膠的顏色不一樣
不曉得各位能不能理解我的意思
就用EtBr染完色後，膠體呈現上面顏色較亮的情形
就是在洞口那排較亮
可是我明明染色時是平行放入應該不會有染色不均的問題
而且有時候會出現有時則否，完全是看天吃飯= =
最近則是比較常出現
到底是哪個環節出現問題
不曉得有沒有好心的大大可以點破癥結點，感恩~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
1F：→ Ianthegood:EtBr有帶電, 本來就會隨著電泳往上爬吧 是問這個嗎? 08/14 18:26
2F：→ skybreeze:是不是有新加EtBr還沒混勻就放下去 不然就照膠前泡水 08/14 18:43
3F：推 Realthugz:這個應該是staining外染 08/14 22:45
4F：→ nike77114:看起來是外染，然後是膠的問題 08/14 23:42
5F：→ nike77114:幾%的膠，agarose有沒有煮融，well跑之前沖一下 08/14 23:44
6F：→ likemsn:不好意思可否再問一下外染是? 08/15 09:19
7F：→ nike77114:外染就是你跑完膠,丟到EtBr(已稀釋)裡面染 08/15 10:55
8F：→ likemsn:對對，我們實驗室是用外染的方式 08/15 11:24
9F：→ likemsn:剛剛我特別把煮膠時間延長，就看下午跑出來結果如何~ 08/15 11:25
10F：→ likemsn:謝nike大還有樓上幾位大大解答~^^ 08/15 11:26
11F：→ likemsn:照膠後結果還是一樣耶，還是洞口那排較亮，怎辦? 08/16 16:27
12F：推 windyflyer:煮太久%數會跑掉喔~水會蒸發 08/16 16:43
13F：→ nike77114:agarose是哪一牌的，是否有過期? 08/16 23:17
14F：推 mesenchymal:染完照膠前用水洗一下，另外可以的話放一下照片吧! 08/17 02:56
15F：→ WinnieDad:外染一般不會有這種問題，我也認為應該放照片上來看看。 08/17 21:11
16F：→ lluunnaa:看樣子應該是膠的關係,我用微波爐加熱25ml 7% agarose 08/20 21:40
17F：→ lluunnaa:分段加熱兩次各40秒,凝膠約30分鐘,110V跑起來蠻漂亮的 08/20 21:42
18F：→ lluunnaa:然後.....是用過期的agarose XD 08/20 21:42
19F：→ nike77114:Agarose有用到7% 會不會太高@@? 08/21 13:38
20F：推 qiet:7% !!!? 08/25 02:53
21F：→ likemsn:我是原PO，我不曉得是不是因禍得福，今天跑電泳時有一隻小 08/28 16:14
22F：→ likemsn:強跑進去淹死，所以我把TBE buffer倒掉換新的，結果跑出來 08/28 16:15
23F：→ likemsn:結果就沒有well那排比較亮的情形了Orz 08/28 16:17
24F：→ likemsn:所以電泳槽的TBE buffer離子也是會消耗的囉? 08/28 16:19
25F：→ nike77114:離子會不平衡 09/03 13:44
26F：→ lluunnaa:0.7% agarose 抱歉打錯了 04/26 16:30