作者likemsn (是喜欢msn不是喜欢男生)
看板Biotech
标题[求救] pcr跑胶呈色不均
时间Tue Aug 14 16:43:54 2012
这个...新手小弟上来发问
既marker跑不一样高之後，又遇到跑胶的颜色不一样
不晓得各位能不能理解我的意思
就用EtBr染完色後，胶体呈现上面颜色较亮的情形
就是在洞口那排较亮
可是我明明染色时是平行放入应该不会有染色不均的问题
而且有时候会出现有时则否，完全是看天吃饭= =
最近则是比较常出现
到底是哪个环节出现问题
不晓得有没有好心的大大可以点破症结点，感恩~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
1F：→ Ianthegood:EtBr有带电, 本来就会随着电泳往上爬吧 是问这个吗? 08/14 18:26
2F：→ skybreeze:是不是有新加EtBr还没混匀就放下去 不然就照胶前泡水 08/14 18:43
3F：推 Realthugz:这个应该是staining外染 08/14 22:45
4F：→ nike77114:看起来是外染，然後是胶的问题 08/14 23:42
5F：→ nike77114:几%的胶，agarose有没有煮融，well跑之前冲一下 08/14 23:44
6F：→ likemsn:不好意思可否再问一下外染是? 08/15 09:19
7F：→ nike77114:外染就是你跑完胶,丢到EtBr(已稀释)里面染 08/15 10:55
8F：→ likemsn:对对，我们实验室是用外染的方式 08/15 11:24
9F：→ likemsn:刚刚我特别把煮胶时间延长，就看下午跑出来结果如何~ 08/15 11:25
10F：→ likemsn:谢nike大还有楼上几位大大解答~^^ 08/15 11:26
11F：→ likemsn:照胶後结果还是一样耶，还是洞口那排较亮，怎办? 08/16 16:27
12F：推 windyflyer:煮太久%数会跑掉喔~水会蒸发 08/16 16:43
13F：→ nike77114:agarose是哪一牌的，是否有过期? 08/16 23:17
14F：推 mesenchymal:染完照胶前用水洗一下，另外可以的话放一下照片吧! 08/17 02:56
15F：→ WinnieDad:外染一般不会有这种问题，我也认为应该放照片上来看看。 08/17 21:11
16F：→ lluunnaa:看样子应该是胶的关系,我用微波炉加热25ml 7% agarose 08/20 21:40
17F：→ lluunnaa:分段加热两次各40秒,凝胶约30分钟,110V跑起来蛮漂亮的 08/20 21:42
18F：→ lluunnaa:然後.....是用过期的agarose XD 08/20 21:42
19F：→ nike77114:Agarose有用到7% 会不会太高@@? 08/21 13:38
20F：推 qiet:7% !!!? 08/25 02:53
21F：→ likemsn:我是原PO，我不晓得是不是因祸得福，今天跑电泳时有一只小 08/28 16:14
22F：→ likemsn:强跑进去淹死，所以我把TBE buffer倒掉换新的，结果跑出来 08/28 16:15
23F：→ likemsn:结果就没有well那排比较亮的情形了Orz 08/28 16:17
24F：→ likemsn:所以电泳槽的TBE buffer离子也是会消耗的罗? 08/28 16:19
25F：→ nike77114:离子会不平衡 09/03 13:44
26F：→ lluunnaa:0.7% agarose 抱歉打错了 04/26 16:30