作者preprice (V)
看板Biotech
標題[求救] 抽E.coli的DNA
時間Sat Aug 11 17:14:18 2012
最近做專題學長教我抽大腸桿菌的DNA
他叫我照著Kit的方法做
我們用的kit是GE healthcare bacteria genomicPrep Mini Spin Kit
剛剛用到第4步驟 加LysisBuffer4的時候
下面會有果凍狀的物質出現 裡面有白色棉絮狀物質
說明書說要將上清液移過去 可是都會吸到果凍 就把濾膜塞住了
他的步驟是寫離心後丟棄下層物質，但因為他是果凍狀根本用不下去
我就多離幾次還是沒有後我就加了下個步驟的Wash buffer
這步驟有成功過濾了，果凍狀物質消失，此時DNA應該是附著在濾膜上了
但是後來加入回溶溶液後，離心還是有一些液體在濾膜上方無法通過
在離心一次之後就只剩下些微了
但我拿回溶之後的液體，去測OD260
如果稀釋的話 吸光值是負值
如果不稀釋的話 吸光值約0.1~0.2
請問我這樣可能是哪裡有問題了呢?
謝謝
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◆ From: 111.254.230.63
※ 編輯: preprice 來自: 111.254.224.139 (08/11 20:30)
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1F：→ spirithorse:buffer4加入後,室溫作用5min,離心1000g,再室溫5mins 08/11 21:24
2F：→ spirithorse:請問是1000g還是沒辦法把上清液分離出來嗎?? 08/11 21:25
3F：→ lask:我是離心10分鐘 12000g 直接用倒的XD 08/11 21:30
4F：→ lask:挖哩 你 wash buffer裡有水 DNA當然就回溶衝走了阿.... 08/11 21:31
5F：→ lask:你離心轉速多大 08/11 21:31
6F：→ preprice:上清液還可以 用抽的會抽到一點果凍 用到的就全進去了 08/11 21:38
7F：→ preprice:離心速度是11000g 08/11 21:38
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8F：推 joseph103331:照這樣描述的感覺是反應不完全 08/12 18:34
9F：→ RickyKckao:菌量用多少啊?? 08/12 21:50