作者preprice (V)
看板Biotech
标题[求救] 抽E.coli的DNA
时间Sat Aug 11 17:14:18 2012
最近做专题学长教我抽大肠杆菌的DNA
他叫我照着Kit的方法做
我们用的kit是GE healthcare bacteria genomicPrep Mini Spin Kit
刚刚用到第4步骤 加LysisBuffer4的时候
下面会有果冻状的物质出现 里面有白色棉絮状物质
说明书说要将上清液移过去 可是都会吸到果冻 就把滤膜塞住了
他的步骤是写离心後丢弃下层物质，但因为他是果冻状根本用不下去
我就多离几次还是没有後我就加了下个步骤的Wash buffer
这步骤有成功过滤了，果冻状物质消失，此时DNA应该是附着在滤膜上了
但是後来加入回溶溶液後，离心还是有一些液体在滤膜上方无法通过
在离心一次之後就只剩下些微了
但我拿回溶之後的液体，去测OD260
如果稀释的话 吸光值是负值
如果不稀释的话 吸光值约0.1~0.2
请问我这样可能是哪里有问题了呢?
谢谢
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◆ From: 111.254.230.63
※ 编辑: preprice 来自: 111.254.224.139 (08/11 20:30)
※ 编辑: preprice 来自: 111.254.224.139 (08/11 21:08)
1F：→ spirithorse:buffer4加入後,室温作用5min,离心1000g,再室温5mins 08/11 21:24
2F：→ spirithorse:请问是1000g还是没办法把上清液分离出来吗?? 08/11 21:25
3F：→ lask:我是离心10分钟 12000g 直接用倒的XD 08/11 21:30
4F：→ lask:挖哩 你 wash buffer里有水 DNA当然就回溶冲走了阿.... 08/11 21:31
5F：→ lask:你离心转速多大 08/11 21:31
6F：→ preprice:上清液还可以 用抽的会抽到一点果冻 用到的就全进去了 08/11 21:38
7F：→ preprice:离心速度是11000g 08/11 21:38
※ 编辑: preprice 来自: 111.254.224.139 (08/11 23:37)
8F：推 joseph103331:照这样描述的感觉是反应不完全 08/12 18:34
9F：→ RickyKckao:菌量用多少啊?? 08/12 21:50