作者sylvialalala (sylvia)
看板Biotech
標題[求救] Real time PCR稀釋倍數跟ct相關性不一致
時間Sat Aug 11 12:28:43 2012
最近第一次使用real time pcr test cdna
測試樣本前老闆要我先測試primer
就是以不同稀釋倍數（1/1,1/4,1/16...1/1024)的sample來看ct是否差2個cycle
結果出來，3重複間有的會差到兩個cycle，然後各稀釋濃度間的slope也不是2
（很多大於2)
老闆跟我說有可能是：
1.pipet有誤差
2.cdna裡面的inhibitor讓最高的濃度那管比較難p，所以slope才會大於2
建議我cdna先purify後再分裝成不同濃度再test
想請問大家除了這兩個原因之外還有什麼我應該要注意的？
第一次使用好多地方不是很懂
還有在pipetting上應該要注意的地方？
我是用abi 7300機器，kapa的sybr，都是先mix在別管裡面（這裡pipet應該沒問題吧？）
再一次將3重複加到96孔盤
希望大家給我一些意見，謝謝！！！
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◆ From: 118.166.192.41
1F：→ xavieraho:Mixture加之前要vortex，這樣三重複就會比較一致 08/12 21:34
2F：→ RickyKckao:mix配需要使用量的1.1~1.2倍 避免pipetting lose讓最後 08/12 22:41
3F：→ RickyKckao:一管不足 08/12 22:41
4F：→ sylvialalala:感謝樓上！後來我自己發現應該是template濃度太低 08/16 22:11