作者sylvialalala (sylvia)
看板Biotech
标题[求救] Real time PCR稀释倍数跟ct相关性不一致
时间Sat Aug 11 12:28:43 2012
最近第一次使用real time pcr test cdna
测试样本前老板要我先测试primer
就是以不同稀释倍数（1/1,1/4,1/16...1/1024)的sample来看ct是否差2个cycle
结果出来，3重复间有的会差到两个cycle，然後各稀释浓度间的slope也不是2
（很多大於2)
老板跟我说有可能是：
1.pipet有误差
2.cdna里面的inhibitor让最高的浓度那管比较难p，所以slope才会大於2
建议我cdna先purify後再分装成不同浓度再test
想请问大家除了这两个原因之外还有什麽我应该要注意的？
第一次使用好多地方不是很懂
还有在pipetting上应该要注意的地方？
我是用abi 7300机器，kapa的sybr，都是先mix在别管里面（这里pipet应该没问题吧？）
再一次将3重复加到96孔盘
希望大家给我一些意见，谢谢！！！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.166.192.41
1F：→ xavieraho:Mixture加之前要vortex，这样三重复就会比较一致 08/12 21:34
2F：→ RickyKckao:mix配需要使用量的1.1~1.2倍 避免pipetting lose让最後 08/12 22:41
3F：→ RickyKckao:一管不足 08/12 22:41
4F：→ sylvialalala:感谢楼上！後来我自己发现应该是template浓度太低 08/16 22:11