作者starjim (Jim)
看板Biotech
標題[求救] RNA轉RT時忘記加RT enzyme
時間Sat Aug 4 19:51:49 2012
利用的是fermentas的kit
RNA要轉cDNA時加了dNTP、oligo dT、5Xreaction Buffer
但這次我忘記加了RT enzyme就直接跑了
等跑完RT後 跑PCR發現都沒有band 回想起來才發現忘記加RT enzyme
RT的作用時間是42度C 60分鐘，70度C 5分鐘
我想請問的是可以把之前跑出來的RT product加入enzymeme後再跑一次嗎
因為我的RNA不太夠再跑一次RT...
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◆ From: 111.250.35.198
1F：推 Realthugz:...RNA還活著嗎 08/04 22:28
2F：→ RickyKckao:應該degrade完了吧... 08/04 22:32
3F：→ Ianthegood:不加白不加 sample比enzyme還值錢阿(誤) 08/05 02:29
4F：推 huuban:重抽RNA 08/05 22:06
5F：推 llod:所以RNA剩多少?你把體積放大再試ㄧ次reaction,不過我猜RNA 08/06 10:37
6F：→ llod:已經死光了 08/06 10:37
7F：→ blence:除非你正常RT完20ul體積全部都拿去跑PCR,不然剩下的RNA怎麼 08/06 12:44
8F：→ blence:會不夠？可以看一下RT kit提到的RNA最低用量,應該夠用才對 08/06 12:45
9F：推 joseph103331:至少....有個negative control.... 08/06 16:04
10F：推 icome:品質已經不好了 重做吧 免得後續浪費更多時間 08/06 22:39
11F：推 nike77114:重作。不要浪費時間 08/07 00:07