作者tabo1989 (向日葵大燦笑)
看板Biotech
標題[求救] plasmid DNA & Western blot
時間Tue Jul 31 15:36:27 2012
想請問大家
(1) 我用Genebank 的miniprep抽plasmid DNA
跑DNA膠看起來不純(多在我要的產物上方有雜band，8000-10000 bp)，
且OD260/280 都大於2
請問該如何改善?
(2) 請問當western blot(16 % ) 壓片出來發現26 kDa以下的band都是糊的
(上面大分子band很sharp，看起來沒問題)
我覺得應該是跑膠時過熱導致，但不知道是running or transfer有問題，
請問該如何改善?
(3) 跑SDS PAGE，定福特還是定電流會有差別嗎?哪一個條件比較好?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：→ RickyKckao:(1)那有可能是supercoil form的plasmid 下次確定酒精 07/31 18:12
2F：→ RickyKckao:都去除之後再elute看看OD值 07/31 18:13
3F：→ RickyKckao:(2)試試看把整個tank放在碎冰裡呢? 07/31 18:13
4F：推 BarryJones:(1)可以跑膠之後將有目標DNA片段切膠再做一次elition 07/31 21:25
5F：→ BarryJones:(2)蛋白質條帶擴散應增加電壓 07/31 21:31
6F：→ BarryJones:(3)一般來說:15mA約10分鐘(過上層後),30mA約30~40分鐘 07/31 21:34
7F：→ BarryJones:(3)但也有實驗室固定電壓 07/31 21:35
8F：推 lovenainai:你 miniprep 搖大大力了吧 才會有 gDNA 汙染 08/01 00:10