作者tabo1989 (向日葵大灿笑)
看板Biotech
标题[求救] plasmid DNA & Western blot
时间Tue Jul 31 15:36:27 2012
想请问大家
(1) 我用Genebank 的miniprep抽plasmid DNA
跑DNA胶看起来不纯(多在我要的产物上方有杂band，8000-10000 bp)，
且OD260/280 都大於2
请问该如何改善?
(2) 请问当western blot(16 % ) 压片出来发现26 kDa以下的band都是糊的
(上面大分子band很sharp，看起来没问题)
我觉得应该是跑胶时过热导致，但不知道是running or transfer有问题，
请问该如何改善?
(3) 跑SDS PAGE，定福特还是定电流会有差别吗?哪一个条件比较好?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：→ RickyKckao:(1)那有可能是supercoil form的plasmid 下次确定酒精 07/31 18:12
2F：→ RickyKckao:都去除之後再elute看看OD值 07/31 18:13
3F：→ RickyKckao:(2)试试看把整个tank放在碎冰里呢? 07/31 18:13
4F：推 BarryJones:(1)可以跑胶之後将有目标DNA片段切胶再做一次elition 07/31 21:25
5F：→ BarryJones:(2)蛋白质条带扩散应增加电压 07/31 21:31
6F：→ BarryJones:(3)一般来说:15mA约10分钟(过上层後),30mA约30~40分钟 07/31 21:34
7F：→ BarryJones:(3)但也有实验室固定电压 07/31 21:35
8F：推 lovenainai:你 miniprep 摇大大力了吧 才会有 gDNA 污染 08/01 00:10