作者mzac1b (Goodday)
看板Biotech
標題[求救] 請教RNA 萃取達人
時間Mon Jul 23 15:50:44 2012
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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我在萃取裸鼠皮膚的RNA
但是遇到的問題是皮膚RNA degrade 得很嚴重
若是傷口皮膚則degrade 得更嚴重
據說formamide
http://en.wikipedia.org/wiki/Formamide
可以穩定RNA
因此formamide 在RNA 電泳實驗中可做為Stabiliser
想請問的是....
在使用Trizol 方法萃取RNA 後
在最後回溶的步驟
若用formamide 來回溶RNA 以期達到穩定RNA 的效果
formamide 是否會干擾後續RT 進行?
會問這問題是因為最近要做裸鼠皮膚傷害的microarray
但RNA degrade嚴重難以得到品質好的RNA
因此查到formamide 能穩定RNA...
感謝分享~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
1F：→ cmublue:想知道+1 但是如果後續要轉RT的話不知道會不會有影響 07/23 16:03
2F：→ Ianthegood:RNAse inhibitor 07/23 16:35
3F：→ mzac1b:在回溶RNA 的溶液添加 RNAse inhibitor? 07/23 17:59
4F：→ mzac1b:還是直接用滅菌過的DEPC水效果就很好了? 07/23 18:02
5F：→ mzac1b:其實是我的老師要我用formamide 溶 但我懷疑RT 能做嗎... 07/23 19:00
6F：推 qqmango:想想蛋白質碰到福馬林會怎樣，特別是RTase這麼敏感的酵素 07/23 21:40
7F：→ RickyKckao:皮膚上有很多RNase 主要是它們造成RNA degrade 07/23 23:33
8F：→ mzac1b:formamide是甲醯胺 但我不知道formamide會不會對 07/24 10:43
9F：→ mzac1b:RNA 或 RT 造成甚麼影響 07/24 10:43
10F：→ mzac1b:R大之意是 意味萃取到最後步驟用甚麼溶就沒差了? 07/24 10:45
11F：→ RickyKckao:從一開始萃取RNA時RNase就一直在作用了 試試看在第一步 07/24 12:45
12F：→ RickyKckao:lyse的溶液就加inhibitor試試看 07/24 12:46
13F：→ RickyKckao:然後操作盡量快 維持低溫 降低RNase的作用 07/24 12:47
14F：→ RickyKckao:最後回溶的溶液是不用加inhibitor 07/24 12:49
15F：推 qqmango:啊看錯了，抱歉XD 07/24 21:08