作者mzac1b (Goodday)
看板Biotech
标题[求救] 请教RNA 萃取达人
时间Mon Jul 23 15:50:44 2012
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
我在萃取裸鼠皮肤的RNA
但是遇到的问题是皮肤RNA degrade 得很严重
若是伤口皮肤则degrade 得更严重
据说formamide
http://en.wikipedia.org/wiki/Formamide
可以稳定RNA
因此formamide 在RNA 电泳实验中可做为Stabiliser
想请问的是....
在使用Trizol 方法萃取RNA 後
在最後回溶的步骤
若用formamide 来回溶RNA 以期达到稳定RNA 的效果
formamide 是否会干扰後续RT 进行?
会问这问题是因为最近要做裸鼠皮肤伤害的microarray
但RNA degrade严重难以得到品质好的RNA
因此查到formamide 能稳定RNA...
感谢分享~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
1F：→ cmublue:想知道+1 但是如果後续要转RT的话不知道会不会有影响 07/23 16:03
2F：→ Ianthegood:RNAse inhibitor 07/23 16:35
3F：→ mzac1b:在回溶RNA 的溶液添加 RNAse inhibitor? 07/23 17:59
4F：→ mzac1b:还是直接用灭菌过的DEPC水效果就很好了? 07/23 18:02
5F：→ mzac1b:其实是我的老师要我用formamide 溶 但我怀疑RT 能做吗... 07/23 19:00
6F：推 qqmango:想想蛋白质碰到福马林会怎样，特别是RTase这麽敏感的酵素 07/23 21:40
7F：→ RickyKckao:皮肤上有很多RNase 主要是它们造成RNA degrade 07/23 23:33
8F：→ mzac1b:formamide是甲醯胺 但我不知道formamide会不会对 07/24 10:43
9F：→ mzac1b:RNA 或 RT 造成甚麽影响 07/24 10:43
10F：→ mzac1b:R大之意是 意味萃取到最後步骤用甚麽溶就没差了? 07/24 10:45
11F：→ RickyKckao:从一开始萃取RNA时RNase就一直在作用了 试试看在第一步 07/24 12:45
12F：→ RickyKckao:lyse的溶液就加inhibitor试试看 07/24 12:46
13F：→ RickyKckao:然後操作尽量快 维持低温 降低RNase的作用 07/24 12:47
14F：→ RickyKckao:最後回溶的溶液是不用加inhibitor 07/24 12:49
15F：推 qqmango:啊看错了，抱歉XD 07/24 21:08