作者dirkhou (郎客緊來喔)
看板Biotech
標題[求救] native page
時間Tue Jul 10 15:22:15 2012
最近老師要求要跑native page
因為以前沒有跑過
上次自己看書跑了一遍,可是做western都沒有東西@@
所以想問問大家幾個問題
我的蛋白一個有五個,做完transfection後收細胞
將細胞lysis完後直接跑native page
1.配方:
上層PH6.8,下層PH8.8
皆不含SDS
protein的 PI 大約是4~5左右
電泳由負到正,這樣子應該是跑的下來沒錯吧
2.running buffer
是否要改變什麼配方嗎??也是一樣不含SDS這樣就好嗎
還是要改變PH值??
跑完之後需要做稍微denature的動作嗎??
聽學長說好像要,但他也不確定
他也沒跑過=___=
3.western blot
trasfer buffer配方需要改變嗎
實驗室的就是tris,glycine
跟跑SDS-PAGE的方式一樣去做
不知道這樣有沒有錯誤
因為壓片出來都沒東西
不知道是出了什麼問題
麻煩各位有經驗的大大幫我解答了 謝謝
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◆ From: 111.255.162.124
1F：推 icome:有些抗體蛋白沒煮過認不到 07/10 18:25
2F：推 alaric:既然是跑Native,就是不能Denatured,SDS最好是沒有或是極少. 07/10 22:55
3F：→ alaric:還有小心有polymer, low Gel濃度要再試. 不然, 要跑很久. 07/10 22:57
4F：→ alaric:另外, 也有專門Blue Native PAGE, 配方有點不同. 07/10 22:58