作者dirkhou (郎客紧来喔)
看板Biotech
标题[求救] native page
时间Tue Jul 10 15:22:15 2012
最近老师要求要跑native page
因为以前没有跑过
上次自己看书跑了一遍,可是做western都没有东西@@
所以想问问大家几个问题
我的蛋白一个有五个,做完transfection後收细胞
将细胞lysis完後直接跑native page
1.配方:
上层PH6.8,下层PH8.8
皆不含SDS
protein的 PI 大约是4~5左右
电泳由负到正,这样子应该是跑的下来没错吧
2.running buffer
是否要改变什麽配方吗??也是一样不含SDS这样就好吗
还是要改变PH值??
跑完之後需要做稍微denature的动作吗??
听学长说好像要,但他也不确定
他也没跑过=___=
3.western blot
trasfer buffer配方需要改变吗
实验室的就是tris,glycine
跟跑SDS-PAGE的方式一样去做
不知道这样有没有错误
因为压片出来都没东西
不知道是出了什麽问题
麻烦各位有经验的大大帮我解答了 谢谢
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◆ From: 111.255.162.124
1F：推 icome:有些抗体蛋白没煮过认不到 07/10 18:25
2F：推 alaric:既然是跑Native,就是不能Denatured,SDS最好是没有或是极少. 07/10 22:55
3F：→ alaric:还有小心有polymer, low Gel浓度要再试. 不然, 要跑很久. 07/10 22:57
4F：→ alaric:另外, 也有专门Blue Native PAGE, 配方有点不同. 07/10 22:58