作者likemsn (是喜歡msn不是喜歡男生)
看板Biotech
標題[閒聊] 有關PCR的taq enzyme
時間Fri Jul 6 17:21:49 2012
小弟算是作PCR實驗的新手
作實驗作了一段時間後
發現作PCR的 taq enzyme是一個很奇妙的東西
我們家作實驗時會把PCR buffer，dNTP mix，primer和taq先加在一起
之後在"放在冰上"操作
可是據小弟瞭解，taq不是一種很穩定的東西嘛?
它連九十幾度高溫都可以忍受
那為啥不能在室溫下操作?
而且保存時都要放在-20度
這個問題我想了很久，不曉得有沒有高手可以幫我解答
感謝~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
1F：推 huuban:室溫操作可以啊，只是因為是酵素，當然要保護它囉 07/06 18:07
2F：→ huuban:基本上Taq運送的時候是室溫在運送的.. 07/06 18:07
3F：→ forWinds:恩 以前常聽老師說Taq太少的話PCR後期死光就沒了 07/06 18:19
4F：→ ashiniii:能忍受高溫不等於穩定 07/06 18:27
5F：推 qiet:能忍受不代表Taq在那個溫度很開心很穩定 還是會壞的 07/06 19:39
6F：→ qiet:而且一管taq可能會用很多次 所以才要放在冰上 07/06 19:39
7F：推 batatas:90多度可以忍受 可是還是有其壽命 所以你看一般taq都會說 07/06 20:57
8F：→ batatas:45cycle後或72度長時間後 其活性就衰減 07/06 20:59
9F：推 jabari: Taq: 啊啊啊~~ 要壞掉了~~ 07/06 23:15
10F：推 Realthugz:我有聽說你這樣搞會有non-specific binding 07/06 23:31
11F：→ WinnieDad:其中一個重要的原因是低溫下可避免不想要的反應發生，譬 07/09 07:51
12F：→ WinnieDad:如樓上提及的non-specific binding。 07/09 07:52
13F：→ likemsn:感謝各樓層大大精闢的解析~我再消化一下~^^ 07/09 17:05
14F：推 icome:沒錯 放冰上是避免非專一性反應 有hotstart可以放室溫 07/10 08:35