作者c1314205 ()
看板Biotech
標題[求救] western blot band 反白
時間Fri Jul 6 15:29:29 2012
想請問一個問題，壓caspase-3，proform的有壓出來(黑band)，
但是actived caspase-3 的band是白色的，
正負片沒有調，
壓caspase-9(黑band)，沒有這問題，
substrate的反應時間也很少，說是過量反應的話，也很奇怪！
想知道是哪裡出錯了!
麻煩各位了！感激不盡!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 120.101.28.119
1F：推 Realthugz:誰告訴你說短時間不會爆炸的... 07/06 23:33
2F：推 owl628:蛋白量很多的話短時間還是會過量反應阿 07/07 00:58
3F：推 joseph103331:加太多 不到一秒就爆了 07/07 21:07
4F：推 sancra:我碰過很多ab是ECL一加下去，就亮了，肉眼可見 07/08 01:05
5F：推 aeeaee1128:一抗濃度再降低,有回收使用的話再加buffer稀釋吧~ 07/08 01:24
6F：推 knell:同意爆炸+1~ 07/09 11:04
7F：推 umijuki:我是生技公司的廠商，band會反白大多會是跟你的ECL反應太 07/10 20:08
8F：→ umijuki:快速，訊號一下衝上去你的蛋白就燒掉了，一秒也會爆哦~ 07/10 20:09
9F：→ c1314205:爆的話也很奇怪，因為是切出來的，如果會爆，那PROFORM的 07/10 21:41
10F：→ c1314205:也會爆了，因為量比較多。目前是將1抗稀釋2000倍， 07/10 21:43
11F：→ c1314205:proform的背景不在那麼深，可是cleaved 卻沒壓出來。 07/10 21:46
12F：推 icome:substract快速被消耗導致沒訊號 07/12 12:40
13F：→ Anvec:pro- 跟 actived form 是同一支抗體嗎 如果是不同支抗體 07/14 19:11
14F：→ Anvec:可能要調整一下抗體的 titer 如果是同支 通常 act-form 量少 07/14 19:11
15F：→ Anvec:比較難壓出來 有圖可以給大家看會比較清楚是壓沒有還是反白 07/14 19:12
16F：推 silentence:白是反白還是空的? 如果是空就是active form不多 07/14 21:02
17F：推 silentence:反而是要壓久點 07/14 21:05
19F：→ c1314205:19&set=a.265618446885587.60812.100003123028856&type=3 07/25 14:34
20F：→ c1314205:&theater 很抱歉，因為不知如何縮網址，抗體是一樣的! 07/25 14:35