作者higaaoi ()
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標題[求救] FPLC的吸光值
時間Tue Jun 19 22:15:28 2012
事前將海底生物中的蛋白質取出
先用FPLC做分離
有試過一些注射量，不會嚴重改變圖形的前提下
注射比較高的蛋白進去
後來老闆竟然說為什麼OD280 nm怎麼高到2200 mAU 左右
合理的範圍最高在1700 mAU左右才是，最理想是1500 mAU
然後說要稀釋重跑一張圖比較好
他又沒有要定量，而且各Fraction也不純也談不上定量
再說每種蛋白定量的線性範圍可以一視同仁嗎
他是用分光光度計的標準看待FPLC經由column後測量UV的值......
不知道大家看法如何
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 111.240.95.211
1F：→ trumpet:過column後測UV280nm，和分光光度計標準你覺得有何不同?? 06/19 23:09
好像沒不同，原理是一樣，但兩者的數值是否因不同機型，不知道是否能轉換
是對老闆堅持數值不可以高於他講的，感到有點疑惑
分光光度計是知道1.5-2.0 AU算是定量用的最高值了，
接LC的UV detector也是嗎？
※ 編輯: higaaoi 來自: 111.240.95.211 (06/19 23:44)
2F：推 olpo:數值過高或過低會降低偵測的準確性 但是其實不會差很多 06/20 01:50
3F：→ olpo:從以前看過的書來講 理想值附近的準確率是99.9% 06/20 01:52
4F：→ olpo:超過理想值好幾倍準確率只剩99.5% 06/20 01:53
5F：→ olpo:以這些蛋白質實驗來講 其實差沒多少 所以不用擔心老師講的 06/20 01:54
6F：推 sandcu:感覺沒差耶@@ 06/20 19:57