作者gqqueen ()
看板Biotech
標題[求救] 細胞藥物處理後，在soft agar assay探討
時間Mon Jun 18 03:30:00 2012
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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想請問大家一個實驗結果的討論，
我想探討手中的藥物是否影響癌細胞transformation activity，
於是將細胞藥物處理(IC50濃度)三小時候後洗掉，
然後重新種在soft agar中去觀察細胞生長狀況，
結果的確是藥物處理過後的幾乎不長，而對照組則繼續生長，
本來很高興我的藥物的確影響了他的transformation activity，
但後來有個老師問了一個問題，
你怎麼確定細胞經過藥物處理後，
在soft agar assay不長，不是因為細胞死掉或是生長速度變慢，
而是影響到transfomation activity?
這個問題讓我想了很久，還是沒有答案。
目前我有觀察藥物處理後三小時，
細胞型態沒有改變，
拿去看cell cycle細胞多半聚集在S phase 和G2/M，沒看到任何細胞死亡的跡象
另外我同樣的處理也做了clonengenic assay
觀察到細胞的確會因為藥物處理時間長短而影響到他的細胞群落數目
但我還是無法利用我手邊的資料來回答藥物是否影響會transfomation activity?
想請問有做藥物開發的前輩
是否有類似經驗可以建議呢
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◆ From: 122.117.13.40
1F：推 genep:做個proliferation assay? 06/18 04:16
2F：→ gqqueen:同樣藥物處理時間三小時，連續測過0,24,48三天，有的細胞 06/18 11:34
3F：→ gqqueen:在48小時看到有顯著差異，有的則沒有，但在24小時則皆無 06/18 11:35
4F：→ gqqueen:顯著差異 06/18 11:35
5F：→ blence:你藥物處理後在soft agar放多久看colony，clonogenic跟FACS 06/18 12:55
6F：→ blence:也要等一段相同或可比較的時間,才能歸納觀察三個實驗的結果 06/18 12:58
7F：→ gqqueen:soft agar 大概是一個月才觀察的到 clonengenic 約2~3禮拜 06/19 09:21
8F：→ gqqueen:flow最常只有48小時而已 06/19 09:22