作者shenhsu (軒)
看板Biotech
標題[討論] RNA沉澱的方法???
時間Tue Jun 5 09:36:32 2012
實驗室抽取RNA通常是使用pine tree法
Phenol/Chloroform wash後取上清液
加入sample 1/4體積的10M LiCl (最終濃度2M) 在4度C沉降overnight
處理DNase之後加入其stop solution並加熱 就直接進行RT-PCR (不clearn up)
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然而這次實驗室打算送樣進行microarry
按照廠商protocol的話 處理完DNase需要以Phenol/Chloroform 去除DNase
之後500ul sample加入 60ul 3M Sodium acetate (pH=5.2)
1ul Glycogen (5mg/ml)
1mL ice-cold 100% EtOH 並在-80度C沉降overnight
因為實驗室沒有Glycogen....想請問用這2種方式沉降RNA有什麼差別嗎???
另外因為時間安排上有點趕...
如果處理完DNase再以Phenol/Chloroform wash後
用沉降DNA的方式沉澱幾個鐘頭 (isopropanol 或 NaCl & EtOH)
會有什麼影響嗎?
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.144
1F：→ huuban:超過 2ug 可以不加 glycogen 06/05 14:16
2F：→ huuban:-20 o/n 或是 -80 半小時，之前看板上說-80不要放太久 06/05 14:17
3F：→ huuban:這樣不會很久啊，可以照原protocol做沒有問題吧:) 06/05 14:19
4F：推 giinii:我們實驗室用方法2,不加glycogen也ok!但是我們都是-20 O/N 06/07 10:03
5F：→ shenhsu:感謝! 最後為了省時間 嘗試用isopropanol+NaCl -80 1hr 06/07 10:17
6F：→ shenhsu:好像也沉澱的出來沒啥差別 可能我們量都滿高的所以沒差XD 06/07 10:18