作者shenhsu (轩)
看板Biotech
标题[讨论] RNA沉淀的方法???
时间Tue Jun 5 09:36:32 2012
实验室抽取RNA通常是使用pine tree法
Phenol/Chloroform wash後取上清液
加入sample 1/4体积的10M LiCl (最终浓度2M) 在4度C沉降overnight
处理DNase之後加入其stop solution并加热 就直接进行RT-PCR (不clearn up)
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然而这次实验室打算送样进行microarry
按照厂商protocol的话 处理完DNase需要以Phenol/Chloroform 去除DNase
之後500ul sample加入 60ul 3M Sodium acetate (pH=5.2)
1ul Glycogen (5mg/ml)
1mL ice-cold 100% EtOH 并在-80度C沉降overnight
因为实验室没有Glycogen....想请问用这2种方式沉降RNA有什麽差别吗???
另外因为时间安排上有点赶...
如果处理完DNase再以Phenol/Chloroform wash後
用沉降DNA的方式沉淀几个钟头 (isopropanol 或 NaCl & EtOH)
会有什麽影响吗?
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.144
1F：→ huuban:超过 2ug 可以不加 glycogen 06/05 14:16
2F：→ huuban:-20 o/n 或是 -80 半小时，之前看板上说-80不要放太久 06/05 14:17
3F：→ huuban:这样不会很久啊，可以照原protocol做没有问题吧:) 06/05 14:19
4F：推 giinii:我们实验室用方法2,不加glycogen也ok!但是我们都是-20 O/N 06/07 10:03
5F：→ shenhsu:感谢! 最後为了省时间 尝试用isopropanol+NaCl -80 1hr 06/07 10:17
6F：→ shenhsu:好像也沉淀的出来没啥差别 可能我们量都满高的所以没差XD 06/07 10:18