作者keeny (keeny NN )
看板Biotech
標題[討論]plasmid transfection 蛋白表現困境
時間Fri Jun 1 01:02:49 2012
大家好
我最近利用lipofectamine2000轉一個tumor suppresspr sprouty2 plasmid(Flag-Tagged)
到melanoma cell lines(有suppressor表達但低表達)
困難:(1)我可以用western blot看到Flag,但當我用Sprouty2抗體時,Sprouty2量並沒增加
(2)Lipofectamin2000效果很好(我有GFP plasmid當control)
(3)Sprouty2 plasmid transfection應該沒有問題,因為(A)有定序(B)有Flag
(C)Sprouty2 transfection 造成大量下游pERK1/2被抑制這跟reference 一樣
(pcDNA3.1 vector control沒有pERK1/2抑制)
求救:為什麼我看不到Sprouty2增加
Thanks for help!
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oh my god!! 我又在枕頭上流口水啦！！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 150.231.246.1
1F：推 aggaci:抗體確定沒問題嗎? 06/01 03:34
2F：推 HEK293:你確定你看到的是sprouty2? 06/01 08:54
3F：→ keeny:是的. positive control works. 而且沒有non-specific band 06/01 22:55
4F：推 nzj:你有看過S抗體認的位置嗎?如果其是認N端,而tag在C端 06/02 10:51
5F：→ nzj:且N端被切一小斷掉,這個會造成S蛋白的訊號沒有增加 06/02 10:54
6F：→ nzj:所以在band size小的位置有訊號出現嗎?當片段更小時會看不到 06/02 10:57