作者keeny (keeny NN )
看板Biotech
标题[讨论]plasmid transfection 蛋白表现困境
时间Fri Jun 1 01:02:49 2012
大家好
我最近利用lipofectamine2000转一个tumor suppresspr sprouty2 plasmid(Flag-Tagged)
到melanoma cell lines(有suppressor表达但低表达)
困难:(1)我可以用western blot看到Flag,但当我用Sprouty2抗体时,Sprouty2量并没增加
(2)Lipofectamin2000效果很好(我有GFP plasmid当control)
(3)Sprouty2 plasmid transfection应该没有问题,因为(A)有定序(B)有Flag
(C)Sprouty2 transfection 造成大量下游pERK1/2被抑制这跟reference 一样
(pcDNA3.1 vector control没有pERK1/2抑制)
求救:为什麽我看不到Sprouty2增加
Thanks for help!
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oh my god!! 我又在枕头上流口水啦！！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 150.231.246.1
1F：推 aggaci:抗体确定没问题吗? 06/01 03:34
2F：推 HEK293:你确定你看到的是sprouty2? 06/01 08:54
3F：→ keeny:是的. positive control works. 而且没有non-specific band 06/01 22:55
4F：推 nzj:你有看过S抗体认的位置吗?如果其是认N端,而tag在C端 06/02 10:51
5F：→ nzj:且N端被切一小断掉,这个会造成S蛋白的讯号没有增加 06/02 10:54
6F：→ nzj:所以在band size小的位置有讯号出现吗?当片段更小时会看不到 06/02 10:57