作者GPMorgan (駒霹摩根)
看板Biotech
標題[求救] PCNA stain 冷凍切片失敗
時間Sat May 19 23:12:14 2012
嗨，各位版友好
小弟用冷凍切片來染PCNA，希望定量細胞複製的狀況。
所用的樣本是斑馬魚的冷凍切片。
但是一直染不太出來，很多雜訊，而且訊號都不是在細胞核 @@
步驟大概是室溫4%PFA固定30min => Wash => 0.5% T-100 30min
Wash x3 => 一抗1:100 四度ON
Wash x3 => 二抗Dylight 488 1:200 一小時
Wash => DAPI
不知道有沒有人能有什麼建議? 萬分感謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.235.72
1F：→ ray289:螢光顯微觀察收光時間多久? 有沒有同時做negative control? 05/20 00:20
※ 編輯: GPMorgan 來自: 140.114.235.72 (05/21 23:31)
2F：→ GPMorgan:2抗only是沒訊號的~ 目前也還在找其他可能原因 05/21 23:32
3F：→ vandia:問個沒寫清楚的地方:你0.5% T-100是泡在PBS裡沒錯嘛? 05/22 21:13
4F：→ GPMorgan:恩~ 是在PBS裡，我懷疑是要做antigen retrieval 05/22 22:30