作者GPMorgan (驹霹摩根)
看板Biotech
标题[求救] PCNA stain 冷冻切片失败
时间Sat May 19 23:12:14 2012
嗨，各位版友好
小弟用冷冻切片来染PCNA，希望定量细胞复制的状况。
所用的样本是斑马鱼的冷冻切片。
但是一直染不太出来，很多杂讯，而且讯号都不是在细胞核 @@
步骤大概是室温4%PFA固定30min => Wash => 0.5% T-100 30min
Wash x3 => 一抗1:100 四度ON
Wash x3 => 二抗Dylight 488 1:200 一小时
Wash => DAPI
不知道有没有人能有什麽建议? 万分感谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.235.72
1F：→ ray289:萤光显微观察收光时间多久? 有没有同时做negative control? 05/20 00:20
※ 编辑: GPMorgan 来自: 140.114.235.72 (05/21 23:31)
2F：→ GPMorgan:2抗only是没讯号的~ 目前也还在找其他可能原因 05/21 23:32
3F：→ vandia:问个没写清楚的地方:你0.5% T-100是泡在PBS里没错嘛? 05/22 21:13
4F：→ GPMorgan:恩~ 是在PBS里，我怀疑是要做antigen retrieval 05/22 22:30