作者nightA (in dispute)
看板Biotech
標題[求救] real-time PCR 選到絕對定量?
時間Mon May 14 19:24:55 2012
不好意思有幾個問題想請問大家
1.我使用ABI 7500 機器上Real-time PCR
結果不小心選到絕對定量@@(本來應該要用相對定量)
但我從頭到尾也沒有設過甚麼原始濃度等等之類的東西
請問這樣機器幫我算出來的CT值是可信的嗎?orz
2.另外想問CT值的可信範圍是不是大約在15-35個Cycle左右?
3.我是抽動物組織的RNA翻cDNA後上real-time
我同樣的實驗會重複兩到三次,比如二月犧牲一次,三月犧牲一次
(一樣的實驗,不同批老鼠)
請問我可以二月的組織上一次qPCR,三月的組織上一次qPCR
然後把兩次結果加在一起做成一張圖嗎?
畢竟想早點看到結果,可能二月份的做出來有差異
然後三月份的做一次,兩次結果加在一起這樣
還是應該要二月跟三月抽出來的的RNA一起上real-time比較好?
(但是這樣well好像不夠)
謝謝大家了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.120.31
1F：→ dota01:可以裝SDS2.4 把AQ轉RQ 05/14 21:53
2F：推 qiet:1.沒差 2.一般會落在這裡面 但要確定你的反應在>30 cycle還是 05/15 01:04
3F：→ qiet:穩定的 05/15 01:04
4F：→ qiet:3. 可以加在一起 只要你每次轉RT取的RNA量一樣 使用的reagent 05/15 01:05
5F：→ qiet:也都一樣 但可以在跑下一個月的時候放幾隻前一個月的當對照 05/15 01:05
6F：→ qiet:確認批與批之間操作是否一致 05/15 01:06
7F：推 batatas:CT值的可信範圍看曲線比比較準 05/16 21:58